研究人員從血管內(nèi)皮瘤中發(fā)現(xiàn)了一種新的血管增生抑制劑——內(nèi)皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內(nèi)皮抑素的方法,請分析回答下列問題。

(1)從肝細胞中分離出相應(yīng)的RNA,經(jīng)________獲得內(nèi)皮抑素基因,再經(jīng)________進行擴增,以獲得更多的目的基因。
(2)擴增的目的基因與pUC18質(zhì)粒(如圖所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ進行雙酶切,然后用DNA連接酶進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接,還減少了目的基因與目的基因、載體與載體的連接,提高了重組質(zhì)粒的比例。
(3)大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因,LacZ基因便可表達出β半乳糖苷酶,當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時,Xgal便會被β半乳糖苷酶水解成藍色,大腸桿菌將形成藍色菌落。反之,則形成白色菌落。選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)加入的物質(zhì)有________和氨芐青霉素。成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成________顏色的菌落,原因是__________________。
(4)從選擇培養(yǎng)基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),獲得粗提表達產(chǎn)物。將等量毛細血管內(nèi)皮細胞接種于細胞培養(yǎng)板,37 ℃培養(yǎng)。將等量不同濃度的粗提表達產(chǎn)物加進培養(yǎng)孔中,72 h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并統(tǒng)計(或記錄)活的內(nèi)皮細胞數(shù)目,實驗結(jié)果如下表所示。

粗提表達產(chǎn)物濃度/(μg·mL-1)
0
2
4
6
8
10
活的內(nèi)皮細胞數(shù)目(×102)
12
6
2
1
0.5
0.5
實驗結(jié)果說明_____________________________________________________
_____________________________________________________________。

(1)反轉(zhuǎn)錄(或逆轉(zhuǎn)錄)  (聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))(2)反向(任意)(3)IPTG、X-gal   白 重組質(zhì)粒的LacZ基因中插入了目的基因,使LacZ基因不能表達出β-半乳糖苷酶(4)

解析試題分析:
(1)從肝細胞中分離出相應(yīng)的RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄(或逆轉(zhuǎn)錄)獲得內(nèi)皮抑素基因,再利用PCR技術(shù)進行體外擴增,以獲得更多的目的基因。
(2)雙酶切后,目的基因兩端的黏性末端不同,被切開的運載體兩端的黏性末端也不同,這樣可以避免目的基因與載體反向連接,還能減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接,提高了重組質(zhì)粒的比例。
(3)大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因,LacZ基因便可表達出β半乳糖苷酶,當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時,Xgal便會被β半乳糖苷酶水解成藍色,大腸桿菌將形成藍色菌落。反之,則形成白色菌落。選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)加入的物質(zhì)有IPTG、X-gal和氨芐青霉素。因為重組質(zhì)粒的LacZ基因中插入了目的基因,使LacZ基因不能表達出β-半乳糖苷酶,所以成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成白色菌落。
(4)由表中數(shù)據(jù)可知,粗提表達產(chǎn)物濃度越高,活的內(nèi)皮細胞數(shù)目越少,說明重組內(nèi)皮抑素(或粗提表達產(chǎn)物)能夠抑制毛細血管內(nèi)皮細胞的增殖。
考點:本題考查基因工程的相關(guān)知識。
點評:本題意在考查考生的理解應(yīng)用能力和信息轉(zhuǎn)化能力,屬于中等難度題。

練習(xí)冊系列答案
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科目:高中生物 來源:2012-2013學(xué)年江蘇省揚州市高三下學(xué)期5月考前適應(yīng)性考試生物試卷(解析版) 題型:綜合題

研究人員從血管內(nèi)皮瘤中發(fā)現(xiàn)了一種新的血管增生抑制劑——內(nèi)皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內(nèi)皮抑素的方法,請分析回答下列問題。

(1)從肝細胞中分離出相應(yīng)的RNA,經(jīng)________獲得內(nèi)皮抑素基因,再經(jīng)________進行擴增,以獲得更多的目的基因。

(2)擴增的目的基因與pUC18質(zhì)粒(如圖所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ進行雙酶切,然后用DNA連接酶進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接,還減少了目的基因與目的基因、載體與載體的連接,提高了重組質(zhì)粒的比例。

(3)大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因,LacZ基因便可表達出β半乳糖苷酶,當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時,Xgal便會被β半乳糖苷酶水解成藍色,大腸桿菌將形成藍色菌落。反之,則形成白色菌落。選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)加入的物質(zhì)有________和氨芐青霉素。成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成________顏色的菌落,原因是__________________。

(4)從選擇培養(yǎng)基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),獲得粗提表達產(chǎn)物。將等量毛細血管內(nèi)皮細胞接種于細胞培養(yǎng)板,37 ℃培養(yǎng)。將等量不同濃度的粗提表達產(chǎn)物加進培養(yǎng)孔中,72 h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并統(tǒng)計(或記錄)活的內(nèi)皮細胞數(shù)目,實驗結(jié)果如下表所示。

粗提表達產(chǎn)物濃度/(μg·mL1)

0

2

4

6

8

10

活的內(nèi)皮細胞數(shù)目(×102)

12

6

2

1

0.5

0.5

實驗結(jié)果說明_____________________________________________________

_____________________________________________________________。

 

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科目:高中生物 來源:2011-2012學(xué)年北京市海淀區(qū)高三上學(xué)期期中練習(xí)生物試卷 題型:綜合題

(10分)研究人員從血管內(nèi)皮瘤中發(fā)現(xiàn)了一種新的血管增生抑制劑一內(nèi)皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內(nèi)皮抑素的方法,請分析回答下列問題:

(1) 從肝細胞中分離總RNA,經(jīng)_________獲得cDNA,之后經(jīng)過_________擴增內(nèi)皮抑素基因。

(2) 擴增的目的基因與PUC18質(zhì)粒(如圖14所示)都用EcoR I和BamH I進行雙酶切,然后用DNA連接酶進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接,還減少了________的連接,提高了重組質(zhì)粒的比例。

(3) 大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因,lacZ基因便可表達出β-半乳糖苷酶,當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時,X-gal便會被β-半乳糖苷酶水解成藍色,大腸桿菌將形成藍色菌落。反之,則形成白色菌落。

選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)加入_______物質(zhì)。成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成______________顏色的菌落,原因是_____________________。之所以選擇大腸桿菌作為基因工程的受體菌,其突出的優(yōu)點是:___________________________________

(4) 從選擇培養(yǎng)基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),獲得粗提表達產(chǎn)物。將等量毛細血管內(nèi)皮細胞接種于細胞培養(yǎng)板,370C培養(yǎng)。將等量不同濃度的粗提表達產(chǎn)物加進培養(yǎng)孔中,72h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并,______________實驗結(jié)果如下表所示。

結(jié)果說明__________________________________________

 

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科目:高中生物 來源:2012屆北京市海淀區(qū)高三上學(xué)期期中練習(xí)生物試卷 題型:綜合題

(10分)研究人員從血管內(nèi)皮瘤中發(fā)現(xiàn)了一種新的血管增生抑制劑一內(nèi)皮抑素,它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內(nèi)皮抑素的方法,請分析回答下列問題:

(1) 從肝細胞中分離總RNA,經(jīng)_________獲得cDNA,之后經(jīng)過_________擴增內(nèi)皮抑素基因。
(2) 擴增的目的基因與PUC18質(zhì)粒(如圖14所示)都用EcoRI和BamH I進行雙酶切,然后用DNA連接酶進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接,還減少了________的連接,提高了重組質(zhì)粒的比例。
(3) 大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因,lacZ基因便可表達出β-半乳糖苷酶,當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時,X-gal便會被β-半乳糖苷酶水解成藍色,大腸桿菌將形成藍色菌落。反之,則形成白色菌落。
選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)加入_______物質(zhì)。成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成______________顏色的菌落,原因是_____________________。之所以選擇大腸桿菌作為基因工程的受體菌,其突出的優(yōu)點是:___________________________________
(4) 從選擇培養(yǎng)基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),獲得粗提表達產(chǎn)物。將等量毛細血管內(nèi)皮細胞接種于細胞培養(yǎng)板,370C培養(yǎng)。將等量不同濃度的粗提表達產(chǎn)物加進培養(yǎng)孔中,72h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并,______________實驗結(jié)果如下表所示。

結(jié)果說明__________________________________________

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