Question

14．基因工程是指按人們意愿設計，通過改造基因或基因組而改變生物的遺傳特性．基因工程操作過程中需要應運許多種生物技術．請回答下列問題：
（1）用PCR技術特異性地拷貝目的基因時加入引物1和引物2，引物為單鏈DNA片段，是子鏈合成延伸的基礎．兩種引物及其與模板鏈的結合位置如圖1所示．第3輪循環(huán)的產(chǎn)物中，

含有引物A的DNA分子有7個，含有獨立X基因有2個．
（2）如圖2，A、B、C、D表示四種質(zhì)粒，其中箭頭所指部位為酶的識別位點，質(zhì)粒的陰影部分表示標記基因，適于作為目的基因運載體的質(zhì)粒是B，理由是具有與目的基因兩端相同的識別序列，且限制酶EcoRⅠ不會破壞標記基因．
（3）形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制酶MumⅠ和限制酶EcoRⅠ的識別序列及切割位點分別是-C^↓AATTG-和-G^↓AATTC-．圖3表示目的基因兩端的堿基對序列，請在方框中繪出限制酶EcoRⅠ作用后獲得目的基因．
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Answer 1

分析 1、PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術，所利用的原理為DNA分子的復制，因此PCR技術一般用于基因擴增．
2、PCR技術：①概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術；②原理：DNA復制；③條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）；④方式：以指數(shù)的方式擴增，即約2ⁿ；⑤過程：高溫變性、低溫復性、中溫延伸．
3、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．

解答 解：（1）由圖1可知，第3輪循環(huán)后，產(chǎn)物共有2³=8個．由于PCR技術特異性地拷貝目的基因時加入引物1和引物2，引物為單鏈DNA片段，所以在產(chǎn)物中含有引物A的DNA分子有7個，含有獨立X基因有2個．
（2）根據(jù)題意和圖示分析可知：質(zhì)粒B具有與目的基因兩端相同的識別序列，且限制酶EcoRⅠ不會破壞標記基因，所以適于作為目的基因運載體．
（3）由于EcoRⅠ的識別序列及切割位點是-G^↓AATTC-，所以圖3所示的目的基因兩端的堿基對序列，在限制酶EcoRⅠ作用后獲得的目的基因為：

故答案為：
（1）7   2
（2）B  具有與目的基因兩端相同的識別序列，且限制酶EcoRⅠ不會破壞標記基因
（3）

點評 本題考查了基因工程和PCR技術的相關知識，意在考查考生的分析能力、從題中獲取有效信息的能力、理解所學知識要點，構建相應知識框架的能力，難度適中．