Question

7．?dāng)M南芥AtNX1基因編碼一個(gè)位于液泡膜上的Na⁺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可將Na⁺逆濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)至液泡內(nèi)，以降低Na⁺毒害和提高植物的耐鹽性．研究人員利用根瘤農(nóng)桿菌侵染法將AtNX1基因轉(zhuǎn)化到煙草等植物中，能顯著提高其耐鹽特性．
（1）AtNX1基因提高耐鹽的機(jī)理為，Na⁺轉(zhuǎn)運(yùn)至液泡內(nèi)使細(xì)胞液濃度（滲透壓）升高，利于吸水．
（2）AtNX1基因可從構(gòu)建的擬南芥cDNA文庫(kù)中獲�。�
①構(gòu)建cDNA文庫(kù)需要的工具酶有a、b、d．
a．限制酶      b．DNA連接酶    c．RNA聚合酶       d．逆轉(zhuǎn)錄酶
②利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中獲取AtNX1基因（基因序列未知），需根據(jù)AtNX1蛋白氨基酸序列設(shè)計(jì)引物，引物的序列可以有多種，原因是一個(gè)氨基酸有多個(gè)密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種．在PCR體系中需加入其中的全部引物（填“全部”或“任意1種”或“其中2種”）．
（3）如圖為培育轉(zhuǎn)基因苗的基本操作過程．

①步驟Ⅲ的目的是將目的基因（重組DNA分子）轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞．
②步驟Ⅳ的目的是獲得耐鹽的愈傷組織，其培養(yǎng)基中除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物激素外還應(yīng)有鹽（NaCl）．
③步驟Ⅳ和Ⅴ過程要注意控制培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素（不同植物激素）的濃度比例，以便獲得幼苗．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本工具：分子手術(shù)刀”--限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、“分子縫合針”--DNA連接酶、“分子運(yùn)輸車”--載體．
2、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定．

解答 解：（1）分析題意可知，AtNX1基因提高耐鹽的機(jī)理為，Na⁺轉(zhuǎn)運(yùn)至液泡內(nèi)使細(xì)胞液濃度（滲透壓）升高，利于吸水．
（2）①cDNA文庫(kù)的構(gòu)建方法為：某生物某發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合．構(gòu)建cDNA文庫(kù)需要的工具酶有a限制酶、bDNA連接酶、d逆轉(zhuǎn)錄酶．
②利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中獲取AtNX1基因（基因序列未知），需根據(jù)AtNX1蛋白氨基酸序列設(shè)計(jì)引物，由于一個(gè)氨基酸有多個(gè)密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種，因此引物的序列可以有多種．在PCR體系中需加入其中的全部引物．
（3）①步驟Ⅲ中利用了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，目的是將目的基因（重組DNA分子）轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞．
②步驟Ⅳ通過脫分化可以獲得耐鹽的愈傷組織，其培養(yǎng)基中除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物激素外還應(yīng)有鹽（NaCl）．
③步驟Ⅳ和Ⅴ過程要注意控制培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素（不同植物激素）的濃度比例，以便獲得幼苗．
故答案為：
（1）細(xì)胞液濃度（滲透壓）
（2）①a、b、d
②一個(gè)氨基酸有多個(gè)密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種     全部
（3）①將目的基因（重組DNA分子）轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞
②愈傷組織      鹽（NaCl）
③生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素（不同植物激素）

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題