Question

【題目】胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)在基礎(chǔ)生物學(xué)、畜牧學(xué)和醫(yī)學(xué)上具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值，科研人員對(duì)綿羊胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)開(kāi)展研究，回答下列問(wèn)題：

（1）胚胎的獲�。簭耐涝讏�(chǎng)綿羊卵巢采集卵母細(xì)胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)至____________________期后，轉(zhuǎn)移到受精液中進(jìn)行受精。培養(yǎng)24h后，若用顯微鏡觀察到__________________，說(shuō)明該卵子已經(jīng)完成受精作用。為了提高受精效率，可以用_____________________處理卵子，分離外層的卵丘細(xì)胞。

（2）胚胎的分離和培養(yǎng)：挑選正常發(fā)育的胚胎置于培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液的成分除了含無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽外，還需添加_________________________________________（答出2點(diǎn)即可）等營(yíng)養(yǎng)成分。為了使胚胎干細(xì)胞維持不分化狀態(tài)，可以把胚胎與____________________細(xì)胞共同培養(yǎng)。

（3）干細(xì)胞的鑒定：基因A是干細(xì)胞多能性的標(biāo)志基因，在全能干細(xì)胞中高效表達(dá)�？蒲腥藛T從某一代綿羊干細(xì)胞提取總RNA，單位時(shí)間內(nèi)經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-PCR的方法獲得大量的相關(guān)___________________，檢測(cè)標(biāo)志基因的轉(zhuǎn)錄水平鑒定干細(xì)胞的分化狀態(tài)。逆轉(zhuǎn)錄-PCR應(yīng)用的原理是_____________。

Answer 1

【答案】減數(shù)第二次分裂中 在卵細(xì)胞膜和透明帶之間存在兩個(gè)極體 頂體酶 維生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清 飼養(yǎng)層 cDNA 堿基互補(bǔ)配對(duì)

【解析】

1、胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）。

2、胚胎干細(xì)胞的特征：具有胚胎細(xì)胞的特性，體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物任何一種組織細(xì)胞。另一方面，在體外培養(yǎng)條件下，ES細(xì)胞可不斷增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可以進(jìn)行某些遺傳改造。

3、胚胎干細(xì)胞的主要用途是：

①可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；

②是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料。ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持不分化的狀態(tài)。在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí)，就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向分化，這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡機(jī)理提供了有效的手段；

③可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、糖尿病、老年癡呆癥、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；

④培育各種組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問(wèn)題。

（1）卵母細(xì)胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)至減數(shù)第二次分裂中期后，轉(zhuǎn)移到受精液中進(jìn)行受精；受精后在卵細(xì)胞膜和透明帶存在兩個(gè)極體時(shí)，說(shuō)明該卵子已經(jīng)完成受精作用；為了提高受精效率，可以用頂體酶處理卵子，直接溶解卵丘細(xì)胞之間的物質(zhì)，分離外層的卵丘細(xì)胞。

（2）胚胎的培養(yǎng)培養(yǎng)液的成分除了一些無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等成分，以及血清等物質(zhì)；為了使胚胎干細(xì)胞維持不分化狀態(tài)，可以把胚胎與飼養(yǎng)層細(xì)胞共同配光。

（3）經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-PCR獲得大量的相關(guān)cDNA，可以檢測(cè)A基因轉(zhuǎn)錄水平，其原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)。