Question

2．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽．內(nèi)皮素主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)．ET_A是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ET_A基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，為后期ET_A的體外研究奠定基礎(chǔ)．其過(guò)程如圖（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為C^↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C^↓TCGAG）．請(qǐng)分析回答：

（1）完成過(guò)程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶；該酶催化的底物是脫氧核苷酸；
（2）過(guò)程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是．用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是防止質(zhì)粒自身環(huán)化．
（3）過(guò)程④中需要DNA連接酶，去構(gòu)建重組質(zhì)粒．過(guò)程⑥中，要用Ca²⁺預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．
（4）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)．
（5）人皮膚黑色素細(xì)胞上有內(nèi)皮素的特異受體，內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會(huì)刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加．美容時(shí)可以利用注射ET_A達(dá)到美白祛斑效果，試解釋原因：ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合抑制了內(nèi)皮素對(duì)黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①、②、③過(guò)程表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過(guò)程，④表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，⑤表示利用限制酶切割質(zhì)粒的過(guò)程，⑥表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，⑦表示目的基因的檢測(cè)．

解答 解：（1）圖中①是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；該酶催化的底物是脫氧核苷酸．
（2）③是利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過(guò)程，由于限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是．圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，這樣可以防止目的基因與運(yùn)載體反向連接，防止質(zhì)粒自身環(huán)化，即可以使目的基因定向連接到載體上．
（3）過(guò)程④中需要DNA連接酶去構(gòu)建重組質(zhì)粒．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用Ca²⁺（或CaCl₂）預(yù)先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．
（4）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（5）ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合，抑制了內(nèi)皮素對(duì)黑色素細(xì)胞的增值和黑色素的形成，從而達(dá)到美容的目的．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄酶  脫氧核苷酸 
（2）磷酸二酯         防止質(zhì)粒自身環(huán)化（或使目的基因定向連接到載體上）
（3）DNA連接    Ca²⁺（或CaCl₂）  感受態(tài)
（4）檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)（及其表達(dá)量）
（5）ET_A能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因香蕉形成的流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．