Question

【題目】重慶市柑橘產(chǎn)量位居全國前列，且種類豐富。請就重慶各地柑橘產(chǎn)品回答下列問題：

（1）潼南檸檬富含維生素C、檸檬酸等對人體有益的成分，可采用___________法制備檸檬精油，制備過程中加入NaHCO3和Na2SO4的目的是__________________________________________。

（2）長壽柚、梁平柚等均享有盛名，柚子皮用于提取柚皮精油或制備生物活性炭，柚肉用于生產(chǎn)果汁，加入的果膠酶包括______________________和多聚半乳糖醛酸酶，可使渾濁的果汁變得澄清。在工業(yè)生產(chǎn)中還可利用_________________法將果膠酶進行固定化處理，與一般酶制劑相比，固定化酶的突出優(yōu)點是_________________________________________________________。

（3）奉節(jié)臍橙作為重慶柑橘的一張名片為大家熟知和喜愛。西南大學某科研小組設(shè)計實驗尋找制作臍橙果酒的耐酸優(yōu)良酵母菌種，實驗步驟如下：

①土壤取樣：三峽庫區(qū)臍橙主產(chǎn)區(qū)果園土壤，去除表層浮土，取5~25cm處土樣，立即裝入無菌袋。

②增菌：取10g土樣于90mL液體培養(yǎng)基A（添加0．3%~0．5%的醋酸）中，28℃，200轉(zhuǎn)/分鐘搖瓶培養(yǎng)48h。本步驟的目的是增加菌體濃度以及__________________________。

③純化：菌液逐級稀釋，選擇10-4、10-5、10-6三個梯度各0．1mL涂布于WL培養(yǎng)基上，不同酵母菌對WL培養(yǎng)基含有的溴甲酚綠吸收能力不同，因而菌落呈現(xiàn)出黃色至深綠色的不同顏色，以此能明顯區(qū)分不同種酵母菌，則WL培養(yǎng)基是__________（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基。

④篩選：將純化的各單菌落分別接入10mL橙汁中，比較各菌株產(chǎn)氣速度和產(chǎn)氣量，測定酒精度，篩選出發(fā)酵性能優(yōu)良的酵母菌株。

⑤保藏：長期保存可使用甘油管藏法，其中甘油瓶和甘油需使用_______________法滅菌，再加入菌液進行保存。

Answer 1

【答案】壓榨 使檸檬油易于與水分離 果膠分解酶、果膠酯酶 物理吸附、化學結(jié)合 易與產(chǎn)物分離，可反復利用 篩選耐酸酵母菌 鑒別 高壓蒸汽滅菌

【解析】

1、果膠是植物細胞壁以及胞間層的主要成分之一。果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細胞壁和胞間層。在果汁生產(chǎn)中應(yīng)用果膠酶可以提高出汁率和澄清度。

2、制作固定化酵母細胞的實驗步驟：①酵母細胞的活化；②配制0.05mol/L的CaCl2溶液；③配制海藻酸鈉溶液（該實驗成敗的關(guān)鍵步驟）；④海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合；⑤固定化酵母細胞。影響實驗成敗的關(guān)鍵步驟是配制海藻酸鈉溶液。

3、檸檬精油無色透明，主要儲存在檸檬皮部分，由于檸檬精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生部分水解，又會產(chǎn)生原料焦糊問題，所以一般采用壓榨法提取，其提取過程為：石灰水浸泡→漂洗→壓榨→過濾→靜置→再次過濾→檸檬精油。

（1）制備檸檬精油可采用壓榨法。為了提高出油率，需將檸檬皮干燥去水并用石灰水浸泡。制備過程中加入NaHCO3和Na2SO4可以使檸檬油易于與水分離。

（2）果膠酶包括果膠分解酶、果膠酯酶和多聚半乳糖醛酸酶，果膠被分解成可溶性的半乳糖醛酸，可使果汁變得澄清。固定化酶通過物理吸附法、化學結(jié)合法等固定，既容易與產(chǎn)物分離，又可以反復利用。

（3）②果園土壤或果皮都含有豐富的酵母菌，取出的土樣中有多種微生物，需要將耐酸酵母菌篩選出來，因此，使用添加0．3%～0．5%的醋酸的液體培養(yǎng)基A是選擇培養(yǎng)基，既可以初步篩選出目的菌種，又能擴大培養(yǎng)。

③擴大培養(yǎng)后的菌液還需要采用稀釋涂布平板法進行分離純化，使用的WL培養(yǎng)基是在普通培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了溴甲酚綠，這樣可以通過菌落的顏色輔助鑒別目的菌種，其屬于鑒別培養(yǎng)基。

④純化后的各個菌落發(fā)酵性能也有差異，還需要進行發(fā)酵實驗做進一步的比較，最終確定發(fā)酵性能優(yōu)良的酵母菌株。

⑤菌株在進行臨時保藏時，培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)在不斷消耗，同時培養(yǎng)基中還聚集了酵母菌代謝產(chǎn)物，將會影響繁殖甚至誘發(fā)變異，因此需定期更換新的培養(yǎng)基。長期保存使用的甘油瓶和甘油需高壓蒸汽滅菌法滅菌后使用。