閱讀下列實驗原理,分析、設(shè)計有關(guān)問題:
實驗原理:
①核酸在較為劇烈的化學(xué)、物理和酶的因素的影響下很容易降解。在制備DNA時要加入DNA酶的抑制劑檸檬酸鈉,以除去Mg離子,防止DNA酶的激活。
②核酸中的DNA和RNA在生物體內(nèi)均以核蛋白的形式存在,DNA核蛋白在1 mol/L NaCl溶液中溶解度很大,但在0.14 mol/L NaCl溶液中的溶解度很低;而RNA核蛋白溶于0.14 mol NaCl溶液。
③用苯酚處理,可使蛋白質(zhì)變性,且留在苯酚層內(nèi);在DNA溶液中加入25倍體積為95%的酒精,可將DNA分離出來。此時DNA十分粘稠,可用玻璃棒攪成團取出。
④DNA在強酸環(huán)境下,水解產(chǎn)生脫氧核糖等小分子物質(zhì),它與二苯胺酸性溶液反應(yīng),能生成藍(lán)色化合物。
提供的試劑與器材:
檸檬酸鈉溶液、石英砂、0.14 mol/L NaCl溶液、1 mol/L NaCl溶液、苯酚、95%酒精、二苯胺試劑、濃硫酸、花椰菜、研缽、燒杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉網(wǎng)、酒精燈、吸管、試管等。
思考與設(shè)計:
(1)分程序設(shè)計具體的操作步驟,提取新鮮花椰菜細(xì)胞中的DNA。
(2)設(shè)計實驗證明提取物確實為DNA。
(1)①研磨;取10克花椰菜加適量的1mol/L NaCl溶液和少量的檸檬酸鈉,研磨成勻漿;②過濾;③向濾液中加入1mol/L NaCl溶液,并攪拌,再緩緩加入蒸餾水,將濾液稀釋約6倍,隨著NaCl溶液濃度的下降,DNA溶解度逐漸降低,出現(xiàn)絲狀物,靜止沉淀(最好是進行離心處理);④取沉淀物,置于2 mL 1 mol/L NaCl溶液中,使DNA核蛋白再次溶解,再加2 mL苯酚充分振蕩后靜止,待其分層后棄其上層的苯酚,蛋白質(zhì)即被除去;⑤向④步驟留下的下層DNA溶液中加2.5倍體積的97%酒精,此時用玻璃棒攪成團取出,在玻璃棒上的成團物質(zhì)即是DNA。; (2)用適量的濃硫酸處理提取的DNA,再滴加二苯胺溶液數(shù)滴,用沸水加熱,如有藍(lán)色物質(zhì)出現(xiàn)即可證明提取物是DNA。 導(dǎo)解:本題實為具體考查“DNA的粗提取與鑒定”的實驗內(nèi)容,同時考查語言表達等能力。 |
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