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(1)進(jìn)行過程①時(shí)，需用______ 酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為_________。
(2)進(jìn)行過程e時(shí)，需用________酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。
(3)研究發(fā)現(xiàn)，如let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取_______進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中_________(RASmRNA/RAS蛋白質(zhì))含最減少引起的。

(1)過程①酶作用的部位是                鍵，此過程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA，過程②酶作用的部位是                鍵。
(2)①、②兩過程利用了酶的                 特性。
(3)若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過程③的測(cè)序結(jié)果與           酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比，已確定選用何種酶。
(4)如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合，則其識(shí)別、結(jié)合DNA序列位基因的                  。
(5)以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有              (多選)
A．分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提rRNA
B．用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素
C．通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位
D．將抑制成熟基因?qū)�入番茄，其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟。

A．提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因B
B．利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因B
C．利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞
D．將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞

A．分子雜交技術(shù)
B．抗原—抗體雜交
C．抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn)
D．基因槍法

A．HindⅢ2個(gè)，BamHⅠ1個(gè)
B．HindⅢ2個(gè)，BamHⅠ3個(gè)
C．HindⅢ和BamHⅠ各有2個(gè) 　
D．HindⅢ1個(gè)，BamHⅠ2個(gè)

A．a(chǎn)的基本骨架是磷酸和核糖交替連接而成的結(jié)構(gòu)
B．要獲得相同的黏性末端，可以用不同種b切割a和d
C．c連接雙鏈間的A和T，使黏性末端處堿基互補(bǔ)配對(duì)
D．若要獲得未知序列的d，可到基因庫(kù)中尋找

(1)將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒該表達(dá)載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有__________、_________、__________三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對(duì)這些連接產(chǎn)物進(jìn)行_____________。
(2)用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是_____________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物____________。
(3)目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是__________，其合成的產(chǎn)物是____________。
(4)在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是_____________。

A．該質(zhì)粒分子是由四種堿基組成
B．構(gòu)建該表達(dá)載體的工具酶是限制酶和耐高溫DNA聚合酶
C．本實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用GeneⅡ作為載體的標(biāo)記基因
D．質(zhì)粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

(1)該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要體現(xiàn)了__________________原則。
(2)由實(shí)驗(yàn)可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識(shí)別序列分別為______個(gè)和_____個(gè)。
(3)根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請(qǐng)?jiān)谙聢D中標(biāo)出相應(yīng)限制性酶的酶切位點(diǎn)并注明相關(guān)片斷的大小。

(4)已知BamH Ⅰ與BglⅡ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)一段含有數(shù)個(gè)BamH Ⅰ和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后“AGATCC//TCTAGG”和______________序列明顯增多。

(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由___________連接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是___________末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為____________。
(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T－A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d。從雜合子分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有___________種不同DNA片段。
(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是____________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加__________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是____________。