同學(xué)們?cè)凇霸O(shè)計(jì)某地人工生態(tài)林”時(shí)提出以下觀點(diǎn)：①選擇適合本地生長(zhǎng)的樹木種類；②盡量增加樹木種類；③選擇樹種時(shí)注意不同品種生長(zhǎng)的高度。上述觀點(diǎn)提出時(shí)遵循的主要生態(tài)工程建設(shè)原理是                                                 (　　)

A．協(xié)調(diào)與平衡原理　　　　                   B．物質(zhì)循環(huán)再生原理

C．物種多樣性原理                               D．整體性原理

科學(xué)家通過探究DNA載體途徑的RNA干擾技術(shù)抑制端粒酶的活性，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，以尋找一種抑制腫瘤增長(zhǎng)的新途徑。

方法思路：

①構(gòu)建干擾質(zhì)粒________{插入針對(duì)人體端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶亞基(hTERT)的mRNA的干擾序列}和對(duì)照質(zhì)粒PSG－CTR(插入不針對(duì)人體任何DNA序列的對(duì)照組序列)。

②用空質(zhì)粒PSG(不含目的基因)、干擾質(zhì)粒PSG－AS和對(duì)照質(zhì)粒分別感染肝癌細(xì)胞。

③一段時(shí)間后觀察檢測(cè)細(xì)胞的________。計(jì)算細(xì)胞凋亡率，繪制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。結(jié)果如下圖：

請(qǐng)回答下列問題。

(1)完成方法思路中的空格：

①________；③_____________________________________________________。

(2)在構(gòu)建質(zhì)粒時(shí)，要將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞并用________培養(yǎng)基進(jìn)行篩選鑒定，然后再提取。因此，在構(gòu)建的表達(dá)載體質(zhì)粒上必須含有________。

(3)端粒酶可以通過以自身的________為模板，________為原料來合成端粒DNA。

(4)分析DNA載體途徑的RNA干擾技術(shù)能否抑制腫瘤細(xì)胞的增殖？

多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果膠使細(xì)胞壁破損。成熟的番茄果實(shí)中，PG合成顯著增加，能使果實(shí)變紅變軟，但不利于保鮮。利用基因工程減少PG基因的表達(dá)，可延長(zhǎng)果實(shí)保質(zhì)期�？茖W(xué)家將PG基因反向接到Ti質(zhì)粒上，導(dǎo)入番茄細(xì)胞中，得到轉(zhuǎn)基因番茄，具體操作流程如下圖。據(jù)圖回答下列問題：

(1)若已獲取PG的mRNA，可通過________獲取PG基因。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到大腸桿菌中的目的是____________。

(2)用含目的基因的農(nóng)桿菌感染番茄原生質(zhì)體后，可用含有________的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，理由是______________。之后，還需將其置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的蔗糖溶液中，觀察細(xì)胞________現(xiàn)象來鑒別細(xì)胞壁是否再生。

(3)由于導(dǎo)入的目的基因能轉(zhuǎn)錄出反義RNA，且能與________互補(bǔ)結(jié)合，因此可抑制PG基因的正常表達(dá)。若________，則可確定轉(zhuǎn)基因番茄培育成功。

(4)將轉(zhuǎn)入反向鏈接PG基因的番茄細(xì)胞培育成完整的植株，需要用________技術(shù)；其中，愈傷組織經(jīng)________形成完整植株，此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加____________________。

在某些深海魚中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因afp對(duì)提高農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價(jià)值。右圖所示是獲得轉(zhuǎn)基因萵苣的技術(shù)流程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題：

(1)獲取目的基因的主要途徑包括從自然界已有的物種中分離和________。

(2)①過程需要的酶有__________、__________。

(3)重組質(zhì)粒除了帶有抗凍蛋白基因afp以外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子和________，這樣才能構(gòu)成一個(gè)完整的基因表達(dá)載體。

(4)如果受體細(xì)胞C₁是土壤農(nóng)桿菌，則將目的基因?qū)�入它的目的是利用農(nóng)桿菌的________，使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞C₂，并將其插入到受體細(xì)胞C₂中________上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，形成轉(zhuǎn)基因萵苣。經(jīng)②過程獲得的轉(zhuǎn)基因萵苣中的目的基因是否表達(dá)，在分子水平上可用________法進(jìn)行檢測(cè)，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達(dá)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因萵苣培育成功。

降鈣素是一種多肽類激素，臨床上用于治療骨質(zhì)疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學(xué)機(jī)構(gòu)為了研發(fā)一種活性高、半衰期長(zhǎng)的新型降鈣素，從預(yù)期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測(cè)相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個(gè)堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個(gè)堿基對(duì)形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補(bǔ)平，獲得雙鏈DNA，過程如下圖：

↓
獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoRⅠ(識(shí)別序列和切割位點(diǎn)－GAATTC－)和BamHⅠ(識(shí)別序列和
↓
切割位點(diǎn)－ GGATCC－)雙酶切后插入大腸桿菌質(zhì)粒中。下列有關(guān)分析錯(cuò)誤的是 (　　)

A．Klenow酶是一種DNA聚合酶

B．合成的雙鏈DNA有72個(gè)堿基對(duì)

C．EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切的目的是保證目的基因和運(yùn)載體的定向連接

D．篩選重組質(zhì)粒需要大腸桿菌質(zhì)粒中含有標(biāo)記基因

右圖表示細(xì)胞膜上乙酰膽堿(一種神經(jīng)遞質(zhì))受體基因的克隆技術(shù)操作過程，下列相關(guān)分析中正確的是　　　　　 (　　)

A．獲得該mRNA的最佳材料是受精卵

B．構(gòu)建基因表達(dá)載體最可能使用的載體是大腸桿菌

C．完成過程①②必不可少的酶分別是逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶

D．探針篩選的目的是淘汰被感染的細(xì)菌，獲得未被感染的細(xì)菌

某研究所的研究人員將生長(zhǎng)激素基因通過質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，使其表達(dá)，產(chǎn)生生長(zhǎng)激素。已知質(zhì)粒中存在兩個(gè)抗性基因：甲是抗鏈霉素基因，乙是抗氨芐青霉素基因，且目的基因要插入到基因乙中，而大腸桿菌不帶有任何抗性基因。下列敘述正確的是(　　)

A．導(dǎo)入大腸桿菌的質(zhì)粒一定為重組質(zhì)粒

B．RNA聚合酶是構(gòu)建該重組質(zhì)粒必需的工具酶

C．可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒

D．在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，但在含鏈霉素培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的可能是符合生產(chǎn)要求的大腸桿菌

下面是四種不同質(zhì)粒的示意圖，其中ori為復(fù)制必需的序列，amp為氨芐青霉素抗性基因，tet為四環(huán)素抗性基因，箭頭表示一種限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)。若要得到一個(gè)能在四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)而不能在氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的含重組DNA的細(xì)胞，應(yīng)選用的質(zhì)粒是                                             (　　)

某種微生物合成的蛋白酶與人體消化液中的蛋白酶的結(jié)構(gòu)和功能很相似，只是其熱穩(wěn)定性較差，進(jìn)入人體后容易失效�，F(xiàn)要將此酶開發(fā)成一種片劑，臨床治療食物消化不良，最佳方案是                                                             (　　)

A．替換此酶中的少數(shù)氨基酸，以改善其功能

B．將此酶與人蛋白酶進(jìn)行拼接，形成新的蛋白酶

C．重新設(shè)計(jì)與創(chuàng)造一種蛋白酶

D．減少此酶在片劑中的含量

某科學(xué)家從細(xì)菌中分離出耐高溫淀粉酶(Amy)基因a，通過基因工程的方法，將a轉(zhuǎn)到馬鈴薯植株中，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Amy在成熟塊莖細(xì)胞中存在，下列說法正確的是                                                                    (　　)

A．基因a只有導(dǎo)入到馬鈴薯受精卵中才能表達(dá)

B．目的基因來自細(xì)菌，可以不需要載體直接導(dǎo)入受體細(xì)胞

C．基因a導(dǎo)入成功后，將抑制細(xì)胞原有的新陳代謝，開辟新的代謝途徑

D．目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，可隨著馬鈴薯的DNA分子的復(fù)制而復(fù)制，傳給子代細(xì)胞并表達(dá)