目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

（1）建構(gòu)基因表達載體時，必須有               、復(fù)制原點、目的基因、終止子以及                                    。

（2）構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于                    。

（3）pBR322分子中有單個EcoRI限制酶作用位點，EcoRl只能識別序列—GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRl的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端                   。

（4）pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)         ，成功獲得了重組質(zhì)粒。說明                         。

（5）為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是            。圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是                 。

（11分）目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質(zhì)粒，則C表示       。
(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。
_______________________________________________________________________
(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復(fù)________________________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。能形成重組質(zhì)粒的原因是_______________________________________________________________________
(4) 作為受體大腸桿菌應(yīng)不含_______________________，以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是_______，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是______________。
（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X－1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有＿＿＿。（可多選）

（11分）目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質(zhì)粒，則C表示        。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復(fù)________________________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。能形成重組質(zhì)粒的原因是_______________________________________________________________________

 (4) 作為受體大腸桿菌應(yīng)不含_______________________，以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是_______，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是______________。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X－1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有＿＿＿。（可多選）A．X－1  B．X－2   C．X－3   D．X－4

目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于                     。

（2）pBR32Z分子中有單個EcoRI限制酶作用位點，EcoR 1只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRI的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端。                    。

（3）pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)          鍵，成功的獲得了重組質(zhì)粒。說明                                      。

（4）為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是                 ，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是                  。

目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于________。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。說明____________________________________________________。

(4)為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是____________，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是________________。

回答下列關(guān)于基因工程的問題：

如圖是將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

(1)將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒時，用同一種限制性內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的             ，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。

(2)目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細菌細胞時，效率還不高；導(dǎo)入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導(dǎo)入質(zhì)粒；有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A；只有少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：

將得到的細菌涂抹在一個含有                的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導(dǎo)入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件                      ；                                            。

(3)若進一步鑒定證明細菌中導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A還是重組質(zhì)粒，將得到的細菌涂抹在一個含有

                的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌                ，則導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應(yīng)該用                                    作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，主要是借鑒                        的途徑。

(5) 目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于         

       。導(dǎo)入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                    。

回答下列關(guān)于基因工程的問題：
如圖是將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

(1)將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒時，用同一種限制性內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的            ，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。
(2)目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細菌細胞時，效率還不高；導(dǎo)入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導(dǎo)入質(zhì)粒；有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A；只有少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：
將得到的細菌涂抹在一個含有               的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導(dǎo)入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件                     ；                                           。
(3)若進一步鑒定證明細菌中導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A還是重組質(zhì)粒，將得到的細菌涂抹在一個含有
               的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌               ，則導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應(yīng)該用                                   作為探針。
（4）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，主要是借鑒                       的途徑。
(5)目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于         
      。導(dǎo)入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                   。

回答下列關(guān)于基因工程的問題：

如圖是將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

(1)將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒時，用同一種限制性內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的             ，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。

(2)目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細菌細胞時，效率還不高；導(dǎo)入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導(dǎo)入質(zhì)粒；有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A；只有少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：

將得到的細菌涂抹在一個含有                的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導(dǎo)入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件                      ；                                            。

(3)若進一步鑒定證明細菌中導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A還是重組質(zhì)粒，將得到的細菌涂抹在一個含有

                的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌                ，則導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應(yīng)該用                                    作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，主要是借鑒                        的途徑。

(5) 目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于         

       。導(dǎo)入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                    。

回答下列關(guān)于基因工程的問題：

如圖是將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

（1）將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒時，用同一種限制性內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的             ，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。

（2）目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細菌細胞時，效率還不高；導(dǎo)入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導(dǎo)入質(zhì)粒；有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A；只有少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：

將得到的細菌涂抹在一個含有                的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導(dǎo)入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件                      ；                                            。

（3）若進一步鑒定證明細菌中導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A還是重組質(zhì)粒，將得到的細菌涂抹在一個含有

                的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌                ，則導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應(yīng)該用                                    作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細胞內(nèi)，主要是借鑒                        的途徑。

（5）目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于   

       。導(dǎo)入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                    。