Question

【題目】乳酸菌數(shù)量是評價活性乳酸菌制品質(zhì)量的重要指標。研究小組用具有乳酸菌篩選功能的MRS培養(yǎng)基對某品牌酸奶中乳酸菌數(shù)進行研究。將乳酸菌專用MRS培養(yǎng)基倒平板，每個平板接人0．1 mL酸奶樣品的稀釋菌液，涂布均勻。回答下列問題：

（l）為防止雜菌污染需要對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，滅菌是指____。

（2）梯度稀釋時，應(yīng)用____對酸奶進行稀釋。若要將樣品稀釋10倍，可用無菌移液管吸取5 mL酸奶樣品加入盛有____mL稀釋液的三角瓶中充分混勻。

（3）為統(tǒng)計乳酸菌數(shù)量，宜采用____法接種。在實驗中還要設(shè)置未接種的對照組，這樣做的目的是____。

（4）平板接種后需對培養(yǎng)皿進行處理，再放置在培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)。該小組設(shè)計三種不同的處理方案：①將培養(yǎng)皿置于點燃蠟燭的密閉容器內(nèi)，待蠟燭熄滅后將密閉容器放人培養(yǎng)箱；（螢將培養(yǎng)皿直接置于密閉容器內(nèi)后放置在培養(yǎng)箱中；③培養(yǎng)皿不做處理直接放置在培養(yǎng)箱中。為能更真實反映樣品中的乳酸菌數(shù)量，應(yīng)選擇的處理方案是____（填序號），理由是____。

Answer 1

【答案】使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 無菌水 45 稀釋涂布平板 檢驗接種培養(yǎng)基是否受到污染（或培養(yǎng)基滅菌是否徹底） ① 乳酸菌為厭氧菌，氧氣會抑制乳酸菌繁殖，方案①中蠟燭燃燒消耗氧氣，使得乳酸菌是在近似無氧的條件下培養(yǎng)，因而更能真實反映樣品中的乳酸菌數(shù)量

【解析】

1、配制乳酸菌分離培養(yǎng)基的步驟是：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。該培養(yǎng)基的化學成分包括碳源、氮源、水、無機鹽四類營養(yǎng)成分，在培養(yǎng)該細菌的培養(yǎng)基中還需要添加維生素。培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。

2、分離微生物常用的方法：

①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。

②稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。其中，稀釋涂布平板法還可以用于對微生物進行計數(shù)。

（1）培養(yǎng)基制作完成后，需要進行滅菌，常用高壓蒸汽滅菌鍋進行高壓蒸汽滅菌法滅菌。滅菌是指利用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

（2）梯度稀釋時，先用無菌水將樣品稀釋10倍，即酸奶樣品體積∶無菌水體積=1∶9，即可用無菌移液管吸取5mL酸奶樣品加入盛有5×9=45mL無菌水的三角瓶中，使樣品與水充分混勻。

（3）接種微生物的方法有很多，為統(tǒng)計乳酸菌的數(shù)量，宜采用接種方法為稀釋涂布平板法，乳酸桿菌屬于厭氧菌，接種后應(yīng)在無氧條件下培養(yǎng)。在實驗中還要設(shè)置未接種的對照組，在相同的條件下培養(yǎng)，觀察是否有菌落產(chǎn)生，目的是檢驗培養(yǎng)基滅菌是否徹底。

（4）乳酸菌的代謝類型為異養(yǎng)厭氧型，方案①中蠟燭燃燒消耗氧氣，使得乳酸菌是在近似無氧的條件下培養(yǎng)；方案②中密閉環(huán)境存在少量氧氣，方案③沒有處理，氧氣充足，會抑制乳酸菌的繁殖，所以更能真實反映樣品中的乳酸菌數(shù)量的是方案①。