Question

1．如圖是制備抗埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白單克隆抗體的過(guò)程．請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）利用PCR獲取目的基因的過(guò)程中，反應(yīng)體系內(nèi)要加入含有VP40基因的DNA、dNTP、Taq酶和根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成的引物，且反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行．
（2）選用EcoRI和XhoI雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率；VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過(guò)程可稱(chēng)為轉(zhuǎn)化．
（3）過(guò)程⑥常用的不同于植物原生質(zhì)體融合的促融方法是用滅活的病毒處理．若把在HAT選擇培養(yǎng)基上存活的細(xì)胞全部培養(yǎng)在同一培養(yǎng)基中，并從中提取出的抗體不是（是或不是）單克隆抗體．圖示過(guò)程應(yīng)用的生物技術(shù)是基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合．

Answer 1

分析 1、圖示過(guò)程中，①為獲取目的基因，②為形成重組質(zhì)粒，③為目的基因的導(dǎo)入，④為獲取相應(yīng)的蛋白質(zhì)，⑤為注射入B淋巴細(xì)胞，⑥為形成雜交瘤細(xì)胞，⑦為獲取單克隆抗體．
PCR技術(shù)的過(guò)程：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．
2、獲得目的基因的方法：①?gòu)幕�因文�?kù)中獲取  ②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增  ③人工合成（化學(xué)合成）．原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．
3、DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
4、動(dòng)物細(xì)胞融合原理是：細(xì)胞增殖、細(xì)胞膜的流動(dòng)性．
細(xì)胞融合的方法有：物理法：離心、振動(dòng)、電激；化學(xué)法：聚乙二醇；生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺(tái)病毒）．
最廣泛的應(yīng)用是：制備單克隆抗體．一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差．

解答 解：（1）PCR擴(kuò)增時(shí)，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶．故利用PCR獲取目的基因的過(guò)程中，反應(yīng)體系內(nèi)要加入含有VP40基因的DNA、dNTP、Taq酶和根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成的引物，且反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行．
（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來(lái)，因此為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自行環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率；VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過(guò)程可稱(chēng)為轉(zhuǎn)化．
（3）誘導(dǎo)植原生質(zhì)體能融合的方法：物理法：離心、振動(dòng)、電激．化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）．誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有電激、聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒等；過(guò)程⑥常用的不同于植物原生質(zhì)體融合的促融方法是用滅活的病毒處理．若把在HAT選擇培養(yǎng)基上存活的細(xì)胞全部培養(yǎng)在同一培養(yǎng)基中，并從中提取出的抗體不是單克隆抗體．圖示過(guò)程應(yīng)用的生物技術(shù)是基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合．

故答案為：
（1）目的基因的核苷酸序列 緩沖
（2）防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率  轉(zhuǎn)化 
（3）滅活的病毒  不是  基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融

點(diǎn)評(píng) 本題難度不大，綜合性較強(qiáng)，考查了基因工程、單克隆抗體的制備等知識(shí)，要求考生具有扎實(shí)的基礎(chǔ)知識(shí)，并構(gòu)建一定的知識(shí)網(wǎng)絡(luò)．