Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒(HPV)與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，抗 HPV 的單克隆抗體可以準(zhǔn)確檢測 出 HPV，從而及時監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生，以下是以 HPV 衣殼蛋白為抗原制備出單克隆 抗體的過程，請據(jù)圖回答下列問題：

(1)單克隆抗體制備過程中涉及的細(xì)胞工程技術(shù)有 ____________________________ 。

(2)雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細(xì)胞相比具有的特點是 ____________________ ，在HAT 培養(yǎng)基上存活的細(xì)胞可能包括_______(填下列序號)。

①無抗體分泌的細(xì)胞 ②抗 HPV 抗體的分泌細(xì)胞 ③其他無關(guān)抗體的分泌細(xì)胞

(3)對于抗 HPV 抗體檢測呈 ___（陰、陽）性的雜交瘤細(xì)胞應(yīng)盡早進(jìn)行克隆化， 雜交瘤細(xì)胞的擴(kuò)大培養(yǎng)，既可在體外培養(yǎng)，也可注射到小鼠_____內(nèi)培養(yǎng)。

Answer 1

【答案】動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合 染色體數(shù)目加倍 ①②③ 陽 腹腔

【解析】

單克隆抗體制備流程：

（1）對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；（2）得到相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；（3）將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長（這種雜種細(xì)胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一的抗體）（5）對上述雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細(xì)胞；（6）最后，將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體制備過程中涉及的細(xì)胞工程技術(shù)有動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合。

（2）因為雜交瘤細(xì)胞含有雙親的遺傳物質(zhì)，故雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目是普通淋巴細(xì)胞的二倍。從小鼠體內(nèi)獲得的淋巴細(xì)胞包括多種效應(yīng)B細(xì)胞，據(jù)圖分析可知：小鼠骨髓瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基上生長，效應(yīng)B細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上存活，但雜交瘤細(xì)胞不一定能分泌抗體，故①無抗體分泌的細(xì)胞、②抗HPV抗體的分泌細(xì)胞、③其它無關(guān)抗體的分泌細(xì)胞都能在HAT培養(yǎng)基上存活。

（3）對于抗體檢測呈陽性的雜交克隆應(yīng)盡早進(jìn)行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細(xì)胞到3～10個細(xì)胞/mL，每孔加入細(xì)胞稀釋液0.1mL，使每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的，雜交瘤細(xì)胞的擴(kuò)大培養(yǎng)過程，既可在體外培養(yǎng)，也可注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)。