Question

3．內蒙古白絨山羊的血管內皮生長因子基因（VEGF164），若在皮膚毛囊細胞中特異性表達，可促進毛囊發(fā)育和毛發(fā)生長，顯著提高羊毛產量．科學家將該基因導入羊胎兒的成纖維細胞核，成功培育出轉基因克隆山羊．技術流程如下圖，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ為限制酶．

請據圖回答．
（1）在構建基因表達載體的過程中，應采用SalⅠ、SphⅠ（填限制酶名稱）對質粒和含綠色熒光基因的DNA片段進行酶切，再經相應處理形成重組質粒．圖中的質粒應具備的基本條件有能在宿主細胞內復制并穩(wěn)定保存、具有1至多個限制酶的切割位點（答出兩點）；
而綠色熒光基因的作用是作為標記基因，檢測目的基因是否導入成纖維細胞（作為標記基因）．
（2）要使VEGF164在皮膚毛囊中表達，須將它與羊絨蛋白基因的啟動子、終止子等調控組件重組起來，構建基因表達載體．
（3）圖中①將基因表達載體導入胎兒成纖維細胞核的方法是顯微注射法．將導入成功的細胞核注入到去核的卵母細胞構成重組細胞，培養(yǎng)成早期胚胎，經圖中②胚胎移植技術可培育成轉基因克隆山羊．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示標志轉基因克隆山羊的培育過程．①表示將目的基因導入受體細胞的過程，將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；②表示胚胎移植過程．在選擇限制酶時，保證目的基因和標記基因不被破壞，同時應有相同黏性末端，本題中綠色熒光基因作為標記基因用于檢測目的基因是否導和受體細胞，在選擇限制酶時不能用EcoRⅠ，而選擇SalⅠ、SphⅠ．

解答 解：（1）構建基因表過載體時，應保證有標記基因、目的基因，因此在選擇限制酶時，保證目的基因和標記基因不被破壞，同時應有相同黏性末端，本題中綠色熒光基因作為標記基因用于檢測目的基因是否導和受體細胞，在選擇限制酶時不能用EcoRⅠ，而選擇SalⅠ、SphⅠ．質粒應具備的基本條件有能在宿主細胞內復制并穩(wěn)定保存、具有1至多個限制酶的切割位點、具有標記基因等；而綠色熒光基因的作用是作為標記基因，檢測目的基因是否導入成纖維細胞．
（2）基因表達載體的組成部分包括目的基因、標記基因、啟動子和終止子．
（3）動物基因工程中將目的基因導入受體細胞常用顯微注射法，動物胚胎工程得到的早期胚胎通過胚胎移植技術可培育成轉基因克隆山羊．
故答案為：
（1）SalⅠ、SphⅠ能在宿主細胞內復制并穩(wěn)定保存、具有1至多個限制酶的切割位點    
作為標記基因，檢測目的基因是否導入成纖維細胞（作為標記基因）
（2）啟動子、終止子
（3）顯微注射法       胚胎移植

點評 本題考查了基因工程、細胞工程和胚胎工程的有關知識，要求考生能夠掌握基因工程的原理、方法、步驟，掌握限制酶的作用特點以及基因表達載體的組成，再結合所學知識準確答題．