Question

[生物--選修模塊1：生物技術(shù)實踐]
隨著人類基因組計劃的進展和多種生物基因組測序工作的完成，人類跨入了后基因、組和蛋白質(zhì)組時代．對蛋白質(zhì)的研究與應(yīng)用，首先要獲得純度較高的蛋白質(zhì)．
Ⅰ血紅蛋白提取的具體過程可分為：
（1）紅細(xì)胞的洗滌．具體操作過程是

 

．
（2）

 

；
（3）分離血紅蛋白溶液．血紅蛋白混合液在離心管中離心后，從上往下數(shù)第

 

層是紅色透析液體即為血紅蛋白的水溶液；
（4）透析．
Ⅱ透析后的樣品還需經(jīng)過凝膠色譜法進一步純化，其目的是

 

．裝填凝膠色譜柱時，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡在，這是因為

 

．
Ⅲ判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求，可用電泳法對樣品進行

 

，電泳是指

 

．

Answer 1

考點：制備和應(yīng)用固相化酶

專題：

分析：血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定．

解答： 解：Ⅰ、（1）紅細(xì)胞的洗滌目的是去除雜蛋白，過程是將采集的血樣低速短時間離心，吸出上層透明黃色血漿，再用五倍體積的生理鹽水低速短時間離心重復(fù)洗滌三次．
（2）血紅蛋白的釋放：在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白．
（3）分離血紅蛋白溶液：試管中的溶液分為4層．第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物．血紅蛋白混合液在離心管中離心后，從上往下數(shù)第3層是紅色透析液體即為血紅蛋白的水溶液；
（4）透析：可以去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)，或用于更換樣品的緩沖液．
Ⅱ、透析后的樣品還需經(jīng)過凝膠色譜法進一步純化，其目的是去除相對分子量較大的雜質(zhì)蛋白．裝填凝膠色譜柱時，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡在，這是因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果．
Ⅲ、判斷純化的蛋白質(zhì)是否達(dá)到要求，可用電泳法對樣品進行純度鑒定，電泳是指帶電離子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程．
故答案為：Ⅰ將采集的血樣低速短時間離心，吸出上層透明黃色血漿，再用五倍體積的生理鹽水低速短時間離心重復(fù)洗滌三次   血紅蛋白的釋放  3
Ⅱ去除相對分子量較大的雜質(zhì)蛋白    氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果
Ⅲ純度鑒定   帶電離子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程

點評：本題考查血紅蛋白提取和分離的相關(guān)知識，考查基本，來自課本，是基礎(chǔ)知識考試的理想題目，學(xué)生應(yīng)理解加記憶．