Question

某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題。

（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用Sal I酶切，酶切產(chǎn)物用_____________催化連接后，兩個DNA片段的連接結(jié)果有       種。

（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用          酶和  ______  酶對                  進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

（3）為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入________________，理由是                                                  。

（4）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用__________________技術(shù)，愈傷組織經(jīng)                  進(jìn)而形成完整植株，此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加       。

Answer 1

（1）DNA連接酶         3

（2）SalⅠ   HindⅢ （可換順序）        質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA

（3）氨芐青霉素         重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環(huán)素基因被破壞

（4）植物組織培養(yǎng)            細(xì)胞增殖和分化     生長素和細(xì)胞分裂素

解析:

考查基因工程的知識。

（1）連接DNA片段的酶為DNA連接酶。兩個DNA片段的連接結(jié)果有三種：相同的DNA片段連接，不同的DNA片段連接。

（2）BamHI的酶切位點在目的基因（抗鹽基因）中。若用此限制酶，會破壞目的基因的結(jié)構(gòu)，最終得不到轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草，所以選用SalⅠ和HindⅢ對質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割。

（3）由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位點在抗四環(huán)素基因中。在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，抗四環(huán)素基因結(jié)構(gòu)遭到破壞，故只能在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素來篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。

（4）采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可將植物細(xì)胞培育成完整的植株。植物組織培養(yǎng)過程中，愈傷組織經(jīng)細(xì)胞增殖和分化形成完整植株，此過程須向培養(yǎng)基中加入植物激素（如生長素和細(xì)胞分裂素）。