Question

【題目】某研究小組利用“濾膜法”對受污染的河流水體進(jìn)行了大腸桿菌活菌數(shù)目的測定。回答下列問題：

(1)研究人員向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍(lán)水溶液后，裝人圖甲所示的試管中，再將污水樣滴加進(jìn)去振蕩搖勻，一段時(shí)間后，若觀察到溶液顏色變化情況為_________，，說明微生物在培養(yǎng)過程中產(chǎn)生了CO2。若要用重鉻酸鉀檢測微生物在培養(yǎng)過程中是否產(chǎn)生了酒精，具體做法是_________。

(2)利用圖乙所示的“濾膜法”測定大腸桿菌的數(shù)目時(shí)，應(yīng)先制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的滅菌方法是_________，滅菌后待培養(yǎng)基冷卻至_________℃左右時(shí)，在_________附近倒平板。

(3)圖乙中濾膜的孔徑應(yīng)_________(填“大于”“小于”或“等于”)大腸桿菌。若將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間，然后統(tǒng)計(jì)_________色的菌落數(shù)目，就可估算出單位體積樣品中大腸桿菌的數(shù)目，但這樣得到的統(tǒng)計(jì)值往往要比實(shí)際值低，原因是_________。

Answer 1

【答案】由藍(lán)變綠再變黃 取2mL培養(yǎng)液的濾液注入干凈的試管中，再向試管中滴加 0.5mL溶有重鉻酸鉀的濃硫酸溶液，振蕩搖勻后規(guī)察溶液顔色的變化 高壓蒸汽滅菌 50 酒精燈火焰 小于 黑 兩個(gè)或多個(gè)大腸桿菌連在一起時(shí)，平板上只能觀察到一個(gè)菌落

【解析】

二氧化碳可使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃，酒精可以使得重鉻酸鉀溶液由橙色變?yōu)榛揖G色；伊紅為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，大腸桿菌在含有伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金屬光澤，伊紅-美藍(lán)是專一鑒別大腸桿菌的指示劑；常用的純化微生物時(shí)的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（1）微生物細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的CO2可使溴麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃；微生物無氧呼吸產(chǎn)生的酒精可以用重鉻酸鉀進(jìn)行檢測，即取2mL培養(yǎng)液的濾液注入干凈的試管中，再向試管中滴加 0.5mL溶有重鉻酸鉀的濃硫酸溶液，振蕩搖勻后規(guī)察溶液顔色的變化。

（2）微生物培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌；待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近進(jìn)行倒平板。

（3）分析圖解可知，實(shí)驗(yàn)將待測水樣進(jìn)行過濾，得到的濾膜進(jìn)行微生物培養(yǎng)，因此水中的大腸桿菌應(yīng)留在濾膜上，即圖乙中濾膜的孔徑應(yīng)小于大腸桿菌；在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，可以鑒定出菌落為黑色的具有金屬光澤的大腸桿菌菌落，因此該小組通過統(tǒng)計(jì)黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出單位體積樣品中大腸桿菌數(shù)目。由于培養(yǎng)基中兩個(gè)或多個(gè)大腸桿菌連在一起時(shí)，平板上只能觀察到一個(gè)菌落，因此理論上他們的統(tǒng)計(jì)值比實(shí)際值偏低。