Question

【題目】某研究小組利用“濾膜法”對受污染的河流水體進行了大腸桿菌活菌數目的測定�；卮鹣铝袉栴}：

(1)研究人員向葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液中加入適量的溴麝香草酚藍水溶液后，裝人圖甲所示的試管中，再將污水樣滴加進去振蕩搖勻，一段時間后，若觀察到溶液顏色變化情況為_________，，說明微生物在培養(yǎng)過程中產生了CO2。若要用重鉻酸鉀檢測微生物在培養(yǎng)過程中是否產生了酒精，具體做法是_________。

(2)利用圖乙所示的“濾膜法”測定大腸桿菌的數目時，應先制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的滅菌方法是_________，滅菌后待培養(yǎng)基冷卻至_________℃左右時，在_________附近倒平板。

(3)圖乙中濾膜的孔徑應_________(填“大于”“小于”或“等于”)大腸桿菌。若將濾膜轉移到伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間，然后統(tǒng)計_________色的菌落數目，就可估算出單位體積樣品中大腸桿菌的數目，但這樣得到的統(tǒng)計值往往要比實際值低，原因是_________。

Answer 1

【答案】由藍變綠再變黃 取2mL培養(yǎng)液的濾液注入干凈的試管中，再向試管中滴加 0.5mL溶有重鉻酸鉀的濃硫酸溶液，振蕩搖勻后規(guī)察溶液顔色的變化 高壓蒸汽滅菌 50 酒精燈火焰 小于 黑 兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落

【解析】

二氧化碳可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃，酒精可以使得重鉻酸鉀溶液由橙色變?yōu)榛揖G色；伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料，大腸桿菌在含有伊紅美藍培養(yǎng)基上形成的菌落呈深紫色（黑色），并有金屬光澤，伊紅-美藍是專一鑒別大腸桿菌的指示劑；常用的純化微生物時的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（1）微生物細胞呼吸產生的CO2可使溴麝香草酚藍水溶液由藍變綠再變黃；微生物無氧呼吸產生的酒精可以用重鉻酸鉀進行檢測，即取2mL培養(yǎng)液的濾液注入干凈的試管中，再向試管中滴加 0.5mL溶有重鉻酸鉀的濃硫酸溶液，振蕩搖勻后規(guī)察溶液顔色的變化。

（2）微生物培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌；待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近進行倒平板。

（3）分析圖解可知，實驗將待測水樣進行過濾，得到的濾膜進行微生物培養(yǎng)，因此水中的大腸桿菌應留在濾膜上，即圖乙中濾膜的孔徑應小于大腸桿菌；在伊紅美藍培養(yǎng)基上，可以鑒定出菌落為黑色的具有金屬光澤的大腸桿菌菌落，因此該小組通過統(tǒng)計黑色菌落的數目，計算出單位體積樣品中大腸桿菌數目。由于培養(yǎng)基中兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落，因此理論上他們的統(tǒng)計值比實際值偏低。