Question

1．根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題
（1）限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有平末端和黏性末端．
（2）質(zhì)粒運載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：
AATT C…G
G…CTTAA
為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割．兩種酶切割產(chǎn)生的末端必須相同．
（3）如圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，則圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是①④②③，其中有磷酸二酯鍵形成的過程是②④（填序號）．
（4）反轉(zhuǎn)錄過程的模板是mRNA（或RNA），產(chǎn)物是cDNA（或DNA）．若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)，其原理是DNA復(fù)制．
（5）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：
動物基因工程受體細(xì)胞一般是受精卵，導(dǎo)入方法常用顯微注射法．
植物基因工程受體細(xì)胞一般是體細(xì)胞，導(dǎo)入方法常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用Ca²⁺處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)楦惺軕B(tài)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有平末端和黏性末端．
（2）DNA連接酶只能連接具有相同末端的DNA片段，因此兩種酶切割產(chǎn)生的末端必須相同，DNA連接酶才能將它們連接起來．
（3）限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端，因此作用于①；DNA聚合酶用于DNA分子的復(fù)制，能在單鏈上將一個個脫氧核苷酸連接起來，因此作用于④；DNA連接酶能在具有相同堿基末端的兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，因此作用于②；解旋酶能夠?qū)�DNA分子的雙螺旋解開，故作用于③．其中DNA連接酶和DNA聚合酶催化形成磷酸二酯鍵，而限制性核酸內(nèi)切酶催化磷酸二酯鍵斷裂，解旋酶作用于氫鍵．
（4）反轉(zhuǎn)錄過程的模板是mRNA（或RNA），產(chǎn)物是cDNA（或DNA）．PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)） 技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因，其原理是DNA復(fù)制．
（5）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：
動物基因工程受體細(xì)胞一般是受精卵，導(dǎo)入方法常用顯微注射法．
植物基因工程受體細(xì)胞一般是 體細(xì)胞，導(dǎo)入方法常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用Ca²⁺處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)楦惺軕B(tài)．
故答案為：
（1）平末端　黏性末端
（2）相同
（3）①④②③②④
（4）mRNA（或RNA）　cDNA（或DNA）　PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）  DNA復(fù)制
（5）受精卵   顯微注射法    體細(xì)胞   農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法  Ca²⁺      感受

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的操作工具及其作用；識記基因工程的操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．