Question

嗜熱土壤芽胞桿菌產生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產中更好地應用，開展了以下試驗：

Ⅰ.利用大腸桿菌表達BglB酶

（1）PCR擴增bglB基因時，選用 基因組DNA作模板。

（2）如圖為質粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴增的bglB基因重組進該質粒，擴增的bglB基因兩端需分別引入 和 不同限制酶的識別序列。

Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響

（3）據圖1、2可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會 ；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應溫度最好控制在 （單選）。

A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃

Answer 1

（1）嗜熱土壤芽孢桿菌 （2）NdeⅠ BamHⅠ （3）失活 B

【解析】

試題分析：（1）由“嗜熱土壤芽胞桿菌產生的β—葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶”可知bglB基因存在于嗜熱土壤芽胞桿菌，因此可從嗜熱土壤芽胞桿菌基因組文庫中獲取目的基因，然后采用PCR技術擴增bglB基因。

（2）在基因表達載體的構建中，目的基因插入到啟動子和終止子之間，啟動子和終止子之間有Ndel、XbaⅠ、BamHⅠ三種限制酶識別和切割位點。據圖可知，終止子的兩端有XbaⅠ限制酶切割位點，因此不能使用XbaⅠ限制酶切割質粒，故只能用Ndel和BamHⅠ限制酶切割質粒。目的基因與質粒具有相同的粘性末端才可以連接形成重組質粒，所以目的基因兩端需分別引入Ndel和BamHⅠ的識別序列。

（3）根據圖1可知，據圖可知，在溫度為80℃，酶失活；溫度在60℃和70℃時，酶活性基本相等；根據圖2可知，溫度為60℃時酶的相對活性比70℃時的高；因此為高效利用BglB酶降解纖維素，可控制反應溫度在60℃。

本題考查基因工程、酶、育種等知識，意在考查獲取信息、利用信息及所學知識進行分析、判斷的能力及識圖能力

考點：本題考查基因工程和酶的相關知識，意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系，能從圖形中獲取信息、利用信息及運用所學知識進行分析、判斷的能力。

考點分析： 考點1：基因工程、生物技術的安全性和倫理問題 試題屬性

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