Question

紫杉醇具有獨(dú)特的抗腫瘤作用．研究人員從紅豆杉中發(fā)現(xiàn)了一種具有產(chǎn)紫杉醇能力的內(nèi)生真菌．為探究制備紅豆杉內(nèi)生真菌原生質(zhì)體的適宜pH和溫度，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：①培養(yǎng)菌株，離心收集菌絲體，并用滲透壓穩(wěn)定劑洗滌兩次；②將獲得的菌絲體，分別置于不同pH或溫度的培養(yǎng)液中，并加入適量酶液，震蕩、搖勻后，每隔一段時(shí)間，取樣、過濾、離心，用滲透壓穩(wěn)定劑洗滌兩次后，收集純化的原生質(zhì)體．③統(tǒng)計(jì)原生質(zhì)體數(shù)量，結(jié)果如下．

酶解溫度（℃）	原生質(zhì)體產(chǎn)量（×106個(gè)/mL）
25	12
28	22
32	31
35	26

分析回答：
（1）步驟②中，加酶液的目的是

 

，洗滌時(shí)選用滲透壓穩(wěn)定劑的理由是

 

．
（2）結(jié)果表明，制備紅豆杉內(nèi)生真菌原生質(zhì)體的適宜條件是

 

、

 

、

 

．
（3）檢驗(yàn)原生質(zhì)體再生能力，需要配制再生固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基滅菌常采用

 

法，滅菌后需要冷卻到

 

℃左右才能用來倒平板．
（4）實(shí)驗(yàn)中將收集到的原生質(zhì)體濃度為30×10⁶個(gè)/mL培養(yǎng)液先稀釋l0⁴倍，再各取0.1mL稀釋液分別均勻涂布在3個(gè)再生固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)．一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)得到的菌落數(shù)分別為：27、21、24．則原生質(zhì)體再生率（能再生的原生質(zhì)體數(shù)占全部原生質(zhì)體的比例）約為

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物,微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：據(jù)圖分析：原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高的條件為：在PH值=5，酶解時(shí)間在4～5小，酶解溫度為32℃．通常把去除細(xì)胞壁的活細(xì)胞稱為原生質(zhì)體．

解答： 解：（1）原生質(zhì)體是沒有細(xì)胞壁的活細(xì)胞，真菌有細(xì)胞壁，加酶后破壞真菌的細(xì)胞壁，獲得真菌的原生質(zhì)體；由于真菌的細(xì)胞壁遭到破壞，所以洗滌時(shí)，滲透壓穩(wěn)定劑加入為防止原生質(zhì)體被破壞．
（2）由圖可知，原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高：在PH值=5，酶解時(shí)間在4～5小，酶解溫度為32℃．
（3）對(duì)固體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌最常用的方法是高壓蒸汽滅菌；滅菌后需要冷卻，需要將培養(yǎng)基冷卻到不燙手，即大約在50℃作用時(shí)才能倒平板．
（4）實(shí)驗(yàn)中將收集到的原生質(zhì)體濃度為30×10⁶個(gè)/mL培養(yǎng)液先稀釋l0⁴倍，原生質(zhì)體濃度為3000個(gè)/mL，取0.1mL稀釋液，得到30個(gè)．但實(shí)際測得是27、21、24．平均值是24．所以24÷0.1÷3000=0.08．即原生質(zhì)體再生率為8%．
故答案為：
（1）去除內(nèi)生真菌的細(xì)胞壁   維持原生質(zhì)體的正常形態(tài)，防止其破裂
（2）溫度為32℃pH值為5   酶解時(shí)間4～5小時(shí)（或酶解時(shí)間4.5小時(shí)左右）
（3）高壓蒸汽滅菌   50℃
（4）8%

點(diǎn)評(píng)：本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，意在強(qiáng)化學(xué)生識(shí)圖識(shí)表和實(shí)驗(yàn)分析能力．