Question

【題目】如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)．已知目的基因的兩端分別包括有EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)．據(jù)圖回答：
（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè)DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有：目的基因﹣載體連接物、、三種．圖中ampR和tetR可以作為質(zhì)粒表達(dá)載體的基因，其目的是為了鑒別 ．
（2）目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是啟動(dòng)子，其合成的產(chǎn)物是 ．
（3）在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是 ．
（4）若用第一小問的3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)．之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是 ．

Answer 1

【答案】
（1）載體﹣載體連接物；目的基因﹣目的基因連接物；標(biāo)記；受體細(xì)胞中是否含有目的基因
（2）mRNA
（3）EcoRI和BamHI
（4）載體﹣載體連接物；目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物
【解析】解：（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質(zhì)粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現(xiàn)3種連接結(jié)果，即目的基因自身連接形成的連接物，載體自身連接形成的連接物和重組質(zhì)粒，要通過篩選、純化才能選出符合要求的DNA．圖中ampR和tetR可以作為質(zhì)粒表達(dá)載體的標(biāo)記基因，其目的是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因．（2）載體自身形成的連接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四環(huán)素的特點(diǎn)，其他連接物中tetR基因被限制性內(nèi)切酶破壞，不再具有抗四環(huán)素的特點(diǎn)；在整個(gè)操作過程中，ampR基因保持完整，載體（質(zhì)粒）自身連接形成的連接物和目的基因﹣載體連接物（重組質(zhì)粒）都具有抗青霉素的特性．（3）RNA聚合酶與相關(guān)基因的啟動(dòng)子結(jié)合，完成的是轉(zhuǎn)錄過程，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是mRNA．（4）若用第一小問的3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)．之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，由于構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，四環(huán)素抗性基因被破壞，因此能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是載體﹣載體連接物；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，由于青霉素抗性基因沒有被破壞，因此能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物． 所以答案是：（1）載體﹣載體連接物 目的基因﹣目的基因連接物 標(biāo)記 受體細(xì)胞中是否含有目的基因（2）mRNA（3）EcoRI和BamHI（4）載體﹣載體連接物 目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物
【考點(diǎn)精析】根據(jù)題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．