Question

【題目】（9分）下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題：

（1）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用______兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過__________酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于__________________態(tài)的大腸桿菌。

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加__________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中_____________。

（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開。

（4）若用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段。

Answer 1

【答案】（1）BclI和HindⅢ 連接 感受 （2）四環(huán)素 引物甲和引物丙

（3） 都不能 （4）7

【解析】（1）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamH I可能使質粒中啟動子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ。酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于感受態(tài)的大腸桿菌。

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，根據(jù)質粒上的抗性基因，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈。

（3）根據(jù)BamH I和Bcl I的酶切位點，BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為，與兩種酶的酶切位點均不同。

（4）根據(jù)BamH 、Bcl I和Sau3A I的酶切位點，Sau3A I在質粒上有三個酶切位點，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。