Question

［生物-現代生物科技專題］必答題（10分）

Rag₂基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的_______________________。

（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到_______________________期時，可從其內細胞團分離出ES細胞。

（3）步驟③中，需要構建含有基因Rag₂的表達載體�？梢愿鶕�Rag₂基因的_______________________設計引物，利用PCR技術擴增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PsⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag₂基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有_______________________酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的_______________________，用抗Rag₂蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】（10分）

（1）細胞核

（2）囊胚

（3）核苷酸序列    HindⅢ和PstⅠ

（4）蛋白質

【解析】（1）步驟①是核移植過程。體細胞核移植前要除去受體卵母細胞的細胞核，原因是若不去掉卵母細胞的細胞核，就會造成細胞里面就有兩個細胞核，使得遺傳物質是不穩(wěn)定的。

（2）ES細胞是由早期胚胎（囊胚）的內細胞團分離出來的一類細胞。

（3）步驟③過程是導入目的基因——Rag2基因于ES細胞中的基因表達載體的構建過程。在生物體外可通過PCR技術擴增目的基因，其條件是模板DNA、Rag2基因的核苷酸序列設計引物、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶等，另外根據題干可知，獲得Rag2目的基因需要用 HindⅢ和PstⅠ兩種限制酶，所以在構建表達載體時，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。

（4）檢測目的基因是否翻譯相應蛋白質時，應采用抗原—抗體雜交（免疫）法，即提取蛋白質，用相應的抗體進行抗體—抗原雜交，看是否有雜交帶。