Question

1．根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：
（1）cDNA文庫屬于部分基因文庫，其構(gòu)建方法是：用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA通過反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生cDNA片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中．
（2）切割DNA分子的工具是限制性核酸內(nèi)切酶，它能使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，形成黏性末端或平末端．
（3）基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類．既可以“縫合”黏性末端，又可以“縫合”平末端的是T₄DNA連接酶．
（4）將目的基因?qū)�人植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；如果受體細(xì)胞是大腸桿菌，需要用Ca²⁺處理細(xì)胞，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，才能吸收DNA分子．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．
2、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）cDNA屬于部分基因文庫，構(gòu)建方法是利用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA通過逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生cDNA片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中．
（2）切割DNA分子的工具是限制性核酸內(nèi)切酶，它能使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，形成黏性末端或平末端．
（3）DNA連接酶根據(jù)來源分為兩類：T₄DNA連接酶和E•coliDNA連接酶，其中E•coliDNA連接酶只能連接雙鏈DNA的黏性末端，而T₄DNA連接酶既可以連接雙鏈DNA的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA的平末端．
（4）將目的基因?qū)�人植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；如果受體細(xì)胞是大腸桿菌，需要用Ca²⁺處理細(xì)胞，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，才能吸收DNA分子．
故答案為：
（1）部分   mRNA   載體
（2）限制性核酸內(nèi)切酶   磷酸二酯鍵
（3）T₄
（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法   Ca²⁺

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及作用、基因工程的操作步驟，屬于考綱識(shí)記層次的考查．