Question

【題目】人血清白蛋白(HSA) 具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從人血漿中制備。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。

（1）為獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____________合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。

（2）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是_____________（填寫字母，單選）。

A.人血細(xì)胞啟動(dòng)子 B.水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子 C.大腸桿菌啟動(dòng)子 D.農(nóng)桿菌啟動(dòng)子

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是____________。

（4）人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才有活性。與途徑Ⅱ相比，選擇途徑Ⅰ獲取rHSA的優(yōu)勢(shì)是____________________________________。

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，須確認(rèn)rHSA與_________________的生物學(xué)功能一致。

Answer 1

【答案】（1）總RNA （或mRNA）

（2）B

（3）吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化（2分）

（4）水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工（2分）

（5）HSA

【解析】（1）合成總cDNA需提取細(xì)胞中所有的mRNA，然后通過逆轉(zhuǎn)錄過程獲得。采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA時(shí)，母鏈的方向是3＇到5＇，子鏈的延伸方向是5＇到3＇，兩條引物分別與模板鏈的5＇端互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，引導(dǎo)子鏈延伸，故兩條引物延伸方向是相反的。

（2）根據(jù)啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA，需選擇水稻胚乳細(xì)胞的啟動(dòng)子。

（3）農(nóng)桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會(huì)產(chǎn)生一些糖類和酚類物質(zhì)吸引農(nóng)桿菌向受傷組織集中轉(zhuǎn)化。研究證明，主要酚類誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中。水稻是單子葉植物，不能產(chǎn)生上述的酚類化合物，故在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需要添加酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因的轉(zhuǎn)移。

（4）水稻是真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行加工才能形成正確的空間結(jié)構(gòu)，獲得的HAS才有活性，而大腸桿菌是原核生物，細(xì)胞中不具有膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，無法對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行加工。

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，需確認(rèn)rHSA與天然的HSA的生物學(xué)功能是否一致。