Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）自1988年發(fā)現(xiàn)以來，一直是人們研究的熱點(diǎn)。它不僅存在于血管內(nèi)皮，也廣泛存在于各種組織和細(xì)胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，對(duì)維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)有重要作用。內(nèi)皮素主要通過與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。ETA是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效的表達(dá)，其過程如圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為。請(qǐng)據(jù)圖分析并回答下列問題：

（1）進(jìn)行過程①時(shí)，需要加入緩沖液、引物、dNTP和 酶等。完成過程①②③的目的是 。

（2）過程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是 。用兩種限制酶切割獲得不同的黏性末端，其主要目的是 。

（3）構(gòu)建的重組表達(dá)載體，目的基因上游的啟動(dòng)子的作用是 ，除圖示結(jié)構(gòu)外，完整的基因表達(dá)載體還應(yīng)具有 等結(jié)構(gòu)（至少寫出兩個(gè)結(jié)構(gòu)）。

（4）過程⑥要CaCl2預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的 細(xì)胞。

（5）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是 。

（6）人皮膚黑色素細(xì)胞上有內(nèi)皮素的特異受體,內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后,會(huì)刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,從而使黑色素急劇增加。美容時(shí)可以利用注射ETA達(dá)到美白祛斑效果，試解釋原因： 。

Answer 1

【答案】

（1）反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄） 獲取目的基因（ETA基因）

（2） 使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環(huán)化

（3）RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄 復(fù)制原點(diǎn)、終止子

（4）感受態(tài)

（5）檢測(cè)ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量

（6）ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合,減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上內(nèi)皮素受體的結(jié)合,抑制了內(nèi)皮素對(duì)黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成

【解析】