Question

5．人的內(nèi)皮抑素（一種蛋白質(zhì)）能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，進(jìn)而抑制新血管的產(chǎn)生．臨床上通過(guò)靜脈注射含有內(nèi)皮抑素基因的腺病毒感染腫瘤細(xì)胞，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生并釋放內(nèi)皮抑素，抑制新生血管的形成，使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入休眠狀態(tài)并誘導(dǎo)其凋亡．
回答下列問(wèn)題：
（1）從肝細(xì)胞中提取總mRNA，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA（或DNA），根據(jù)內(nèi)皮抑素基因的核苷酸序列（或序列、堿基序列、堿基對(duì)序列或脫氧核苷酸序列）設(shè)計(jì)并合成引物，利用PCR技術(shù)得到大量?jī)?nèi)皮抑素基因．
（2）在構(gòu)建含內(nèi)皮抑素基因的腺病毒并導(dǎo)人受體細(xì)胞的過(guò)程中，以限制酶（或限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶作為工具酶，以腺病毒作為載體．
（3）在進(jìn)入臨床使用前，需用體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行生理、病理檢測(cè)．為獲得大量的血管內(nèi)皮細(xì)胞，首先用胰蛋白（或膠原蛋白）酶處理血管內(nèi)皮組織，使其分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，然后將其放人含血清、血漿等一些天然成分的合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)．
（4）血管內(nèi)皮細(xì)胞被重組腺病毒感染后，若通過(guò)抗原一抗體雜交方法檢測(cè)呈陽(yáng)性并觀(guān)察到細(xì)胞凋亡，則說(shuō)明內(nèi)皮抑素基因得到表達(dá)且具有生物學(xué)活性．
（5）臨床上將含內(nèi)皮抑素基因的腺病毒通過(guò)靜脈注射感染腫瘤細(xì)胞，使腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，這種治療方法屬于體內(nèi)（填“體內(nèi)”或“體外”）基因治療．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、基因治療的種類(lèi)：體外基因治療和體內(nèi)基因治療（注意兩者的區(qū)別），其中效果比較可靠的是體外基因治療．
體外基因治療：先從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，然后再體外完成轉(zhuǎn)移，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞增植培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)，如腺苷酸脫氨酶基因的轉(zhuǎn)移．
體內(nèi)基因治療：用基因工程的方法直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因的方法．

解答 解：（1）以mRNA為模板合成DNA的過(guò)程稱(chēng)為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程；根據(jù)內(nèi)皮抑素基因的核苷酸序列（或序列、堿基序列、堿基對(duì)序列或脫氧核苷酸序列）設(shè)計(jì)并合成引物，利用PCR技術(shù)得到大量?jī)?nèi)皮抑素基因．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要限制酶切割外源DNA分子和運(yùn)載體，其次需要DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．根據(jù)題干信息“臨床上通過(guò)靜脈注射含有內(nèi)皮抑素基因的腺病毒感染腫瘤細(xì)胞”可知，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)以腺病毒作為載體．
（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，首先用胰蛋白（或膠原蛋白）酶處理血管內(nèi)皮組織，使其分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，然后將其放人含 血清、血漿等一些天然成分的合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)．
（4）檢測(cè)目的基因是否表達(dá)產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（5）臨床上將含內(nèi)皮抑素基因的腺病毒通過(guò)靜脈注射感染腫瘤細(xì)胞，使腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，這種治療方法屬于體內(nèi)基因治療．
故答案為：
（1）cDNA（或DNA）　　核苷酸序列（或序列、堿基序列、堿基對(duì)序列或脫氧核苷酸序列）
（2）限制酶（或限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶 　　腺病毒
（3）胰蛋白（或膠原蛋白）　　血清、血漿
（4）抗原一抗體雜交
（5）體內(nèi)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟及各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；了解基因工程技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合題中信息準(zhǔn)確答題．