Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽。內(nèi)皮素主要通過與靶細胞膜上的內(nèi)皮素受體結合而發(fā)揮生物學效應。ETA是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過構建表達載體，實現(xiàn)ETA基因在細胞中高效表達，為后期ETA的體外研究奠定基礎。其過程如圖（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為—C↓CCGGG—，限制酶XhoⅠ的識別序列為—C↓TCGAG—）。請分析回答下列問題：

（1）完成過程①需要的酶是_____________。

（2）過程③中，兩種限制酶在切割DNA時，將_____________鍵斷開，寫出限制酶XhoⅠ切割形成的一個黏性末端_____________________________。

（3）在滿足條件的情況下，圖過程中③與⑤用兩種限制酶分別切割目的基因與質(zhì)粒，獲得不同的黏性末端構建表達載體的方法與用同一種限制酶切割構建表達載體相比，其優(yōu)點是________________。

（4）過程⑥中，要用_____________預先處理大腸桿菌，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蛭�收周圍環(huán)境中DNA分子的___________________________細胞。為了將該過程獲得的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來，應使用含______________的培養(yǎng)基。

（5）圖示過程中將SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，目的是__________________。

Answer 1

【答案】 逆轉(zhuǎn)錄酶 磷酸二酯 防止目的基因與運載體反向連接、質(zhì)粒自身環(huán)化 Ca2+ 感受態(tài) 氨芐青霉素 便于ETA基因的表達及產(chǎn)物的檢測

【解析】分析：①、②、③過程表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過程，④表示基因表達載體的構建過程，⑤表示利用限制酶切割質(zhì)粒的過程，⑥表示將重組質(zhì)粒導入受體細胞的過程，⑦表示目的基因的檢測。

（1）圖中①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；該酶催化的底物是脫氧核苷酸；

（2）③是利用限制酶切割DNA將DNA的磷酸二酯鍵斷開，獲得目的基因的過程，由于限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是；

（3）用兩種限制酶分別切割目的基因與質(zhì)粒，與用同一種限制酶切割構建表達載體相比，其優(yōu)點是防止目的基因與運載體反向連接、質(zhì)粒自身環(huán)化；

（4）過程⑥中，要用Ca2+預先處理大腸桿菌，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蛭�收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞。為了將該過程獲得的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來，由于質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因，所以應使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基；（5）圖示過程中將SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，可以檢測ETA基因能否表達及表達量，便于ETA基因的表達及產(chǎn)物的檢測。