Question

【題目】研究人員用圖1中質(zhì)粒和圖2中含目的基因的片段構(gòu)建重組質(zhì)粒（圖中標(biāo)注了相關(guān)限制酶切割位點(diǎn)），將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后進(jìn)行篩選及PCR鑒定。以下敘述不正確的是

A. 構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程應(yīng)選用BclⅠ和HindⅢ兩種限制酶

B. 使用DNA連接酶將酶切后的質(zhì)粒和目的基因片段進(jìn)行重組

C. 含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌可以在添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存

D. 利用PCR鑒定含目的基因的大腸桿菌時(shí)應(yīng)選用引物甲和引物丙

Answer 1

【答案】C

【解析】

分析題圖：質(zhì)粒和外源DNA分子都含有三種限制酶切點(diǎn)，即限制酶BamHⅠ、BclⅠ和Hind III，其中BamHⅠ切割位點(diǎn)在質(zhì)粒的兩個(gè)標(biāo)記基因上均有，所以不能用該酶切割質(zhì)粒。用BclⅠ和Hind III酶切質(zhì)粒切成兩個(gè)片段，用BclⅠ和Hind III酶能將外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通過(guò)DNA連接酶與質(zhì)粒（含標(biāo)記基因）連接形成的重組質(zhì)粒符合要求，而另一個(gè)重組質(zhì)粒無(wú)標(biāo)記基因，不符合要求。導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌，其重組質(zhì)粒是用BclⅠ和HindIII酶切割的，其中的氨芐青霉素抗性基因已被破壞，故不能抗氨芐青霉素。

用BclⅠ和HindIII酶切質(zhì)粒切成兩個(gè)片段，一個(gè)含四環(huán)素抗性基因，另一個(gè)不含抗性基因；用BclⅠ和HindIII酶能將外源DNA切成三段，只有含目的基因的片段通過(guò)DNA連接酶與含四環(huán)素抗性基因質(zhì)粒連接形成的重組質(zhì)粒符合要求，而另一個(gè)重組質(zhì)粒無(wú)抗性基因，不符合要求，A正確；將目的基因與質(zhì)粒形成基因表達(dá)載體需要用DNA連接酶連接，B正確；由于構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需用BclⅠ酶和HindⅢ酶切質(zhì)粒，質(zhì)粒上氨芐青霉素抗性基因被破壞，故含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能在添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存，C錯(cuò)誤； PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，需要引物引導(dǎo)子鏈合成，由圖中引物引導(dǎo)子鏈形成的方向可知，利用PCR鑒定含目的基因的大腸桿菌時(shí)應(yīng)選用引物甲和引物丙，D正確。

故選C。