Question

【題目】植物細(xì)胞壁中存在大量不能被豬消化的多聚糖類物質(zhì)，如半纖維素多聚糖、果膠質(zhì)（富含有半乳 糖醛酸的多聚糖）等。研究人員通過基因工程、胚胎工程等技術(shù)培育出轉(zhuǎn)多聚糖酶基因（manA）豬，主要流程如下 圖（neo 為新霉素抗性基因）。

（1）將該重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞后，經(jīng)培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)約有 50%的細(xì)胞能正常表達(dá)目的基因產(chǎn)物，原因 是_____________________________________________________________。通過①過程獲得的重組質(zhì)粒含有 4.9 kb 個(gè)堿基對(duì)，其中 manA 基因含有 1.8 kb 個(gè)堿基對(duì)。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ聯(lián)合酶切割其中一種重組質(zhì)粒，只能獲得 1.7 kb 和 3.2 kb 兩種 DNA 片段，若用上述聯(lián)合酶切割同等長(zhǎng)度的另一種重組質(zhì)粒，則可獲得__________kb 長(zhǎng)度兩種的 DNA 片段。

（2）圖 2 中，豬胎兒成纖維細(xì)胞一般選擇傳代培養(yǎng) 10 代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是__________________________________，豬 的卵母細(xì)胞一般要培養(yǎng)到__________期。

（3）在④過程的早期胚胎培養(yǎng)時(shí)，通常需要定期更換培養(yǎng)液，目的是______________________________________________，一 般培養(yǎng)到__________階段，可向受體移植。

（4）⑤過程前，通常需對(duì)受體母豬注射孕激素，對(duì)其進(jìn)行__________處理。

Answer 1

【答案】目的基因與質(zhì)粒結(jié)合時(shí)，存在正接和反接兩種重組質(zhì)粒 3.5和1.4 保持正常的二倍體核型 減數(shù)第二次分裂中 清除代謝廢物，補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 桑椹胚或囊胚 同期發(fā)情

【解析】

分析題圖：①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建、②為將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、③為體細(xì)胞核移植、④為早期胚胎培養(yǎng)、⑤為胚胎移植。

（1）將該重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞后，經(jīng)培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)約有50%的細(xì)胞能正常表達(dá)目的基因產(chǎn)物，原因是目的基因與質(zhì)粒結(jié)合時(shí)，存在正接和反接兩種重組質(zhì)粒。上述4.9kb的重組質(zhì)粒有兩種形式，若用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切其中一種，只能獲得1.7kb和3.2kb兩種DNA片段，說明右側(cè)BamHI和EcoRI之間的長(zhǎng)度為1.7；用聯(lián)合酶切同等長(zhǎng)度的另一種重組質(zhì)粒，則切割的是BamHI左側(cè)的位點(diǎn)，又因?yàn)?/span>manA基因含有1.8kb個(gè)堿基對(duì)，可獲得1.7+1.8=3.5kb和4.9-3.5=1.4kb兩種DNA片段。

（2）豬胎兒成纖維細(xì)胞一般選擇傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是保持正常的二倍體核型。細(xì)胞在傳至10～50代時(shí)，增殖會(huì)逐漸緩慢，以至于完全停止，這時(shí)部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化。在核移植時(shí)采集的卵母細(xì)胞，在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才進(jìn)行去核操作。

（3）在早期胚胎培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，清除代謝廢物，補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。胚胎一般培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段，可向受體移植。

（4）胚胎移植前，通常需對(duì)受體母豬注射孕激素，使其能同期發(fā)情。