Question

16．骨肉瘤是最常見(jiàn)的惡性成骨性腫瘤之一．科研人員研究曲古抑菌A（TSA）對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制，為臨床治療尋找新方向．實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：
步驟1用含青霉素和鏈霉素的高糖培養(yǎng)基，在37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)人骨肉瘤細(xì)胞一段時(shí)間．
步驟2取適宜濃度的處于生長(zhǎng)旺盛期的人類(lèi)骨肉瘤細(xì)胞，用加入不同濃度的TSA（0～200ng•mL^-1）的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h．
步驟3對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行抽樣檢測(cè)，檢測(cè)方法是先用臺(tái)盼藍(lán)試劑（一種細(xì)胞活性染料）染色再用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞存活率（未染色細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%），結(jié)果如圖1．
步驟4分別提取TSA濃度為0ng•mL^-1、25ng•mL^-1、50ng•mL^-1處理的3組細(xì)胞，測(cè)量細(xì)胞中與凋亡相關(guān)的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌動(dòng)蛋白基因（不同的組織細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)恒定）表達(dá)的蛋白質(zhì)量并計(jì)算比值，結(jié)果如圖2．

分析回答：
（1）骨肉瘤細(xì)胞的惡性增殖和轉(zhuǎn)移與細(xì)胞膜上糖蛋白（成分）種類(lèi)和數(shù)量的改變有關(guān)．高糖培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素的目的是防止雜菌污染，細(xì)胞培養(yǎng)箱中保持5% CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）步驟2中，設(shè)置0ng•mL^-1 TSA實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響．
（3）用臺(tái)盼藍(lán)試劑檢測(cè)細(xì)胞活性的主要原理是活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)（死細(xì)胞膜失去選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)）．
（4）圖1所示結(jié)果表明TSA濃度越高對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用越強(qiáng)．
（5）根據(jù)圖2判斷，骨肉瘤細(xì)胞中Bax基因過(guò)度表達(dá)會(huì)加速細(xì)胞凋亡．

Answer 1

分析 分析圖1可知，隨著處理的TSA濃度增加骨肉瘤細(xì)胞的存活率下降，說(shuō)明TSA濃度增加對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用增強(qiáng)．分析圖2可知，隨著處理的TSA濃度增加，Bcl-2蛋白/β-肌動(dòng)蛋白的比值降低．分析圖3可知，隨著處理的TSA濃度增加，Bax蛋白/β-肌動(dòng)蛋白的比值升高．

解答 解：（1）與正常成骨細(xì)胞相比，骨肉瘤細(xì)胞容易在體內(nèi)分散和轉(zhuǎn)移，其主要原因是骨肉瘤細(xì)胞膜上的糖蛋白等物質(zhì)減少．高糖培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素的目的是防止雜菌污染，細(xì)胞培養(yǎng)箱中保持5% CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中通常要調(diào)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，其中空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)的作用是排除非測(cè)量因素（實(shí)驗(yàn)自變量以外的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響．
（3）根據(jù)細(xì)胞存活率=末染色細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)，可以活細(xì)胞不能被染色，即由于細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)不能進(jìn)入活細(xì)胞，因此，臺(tái)盼藍(lán)是一種活性染色劑．
（4）根據(jù)圖1顯示實(shí)驗(yàn)結(jié)果是隨著處理的TSA濃度增加骨肉瘤細(xì)胞的存活率下降，說(shuō)明TSA濃度增加對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用增強(qiáng)，注意實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明（結(jié)論）不等于實(shí)驗(yàn)結(jié)果．
（5）圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TSA濃度越高Bcl-2表達(dá)蛋白質(zhì)越少，而B(niǎo)ax表達(dá)蛋白質(zhì)越多，說(shuō)明前者蛋白質(zhì)是抑制細(xì)胞凋亡而后者旺盛表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡．
故答案為：
（1）糖蛋白  防止雜菌污染   維持培養(yǎng)液pH
（2）排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
（3）活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)（死細(xì)胞膜失去選擇透過(guò)性，臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)）
（4）TSA濃度越高對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用越強(qiáng)  
（5）Bax

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞癌變等知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問(wèn)題的能力以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析能力．本題在評(píng)講中還可以圍繞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件等進(jìn)行拓展復(fù)習(xí)．