Question

【題目】試回答下列“蛋白質(zhì)提取與分離實(shí)驗(yàn)”的有關(guān)問(wèn)題：

（1）為了提取和分離血紅蛋白，首先對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌以去除雜質(zhì)蛋白，洗滌時(shí)應(yīng)使用生理鹽水而不使用蒸餾水的原因是_____。

（2）若要去除血紅蛋白中的小分子雜質(zhì)，采用圖1裝置。透析液是_____，一段時(shí)間后，若向燒杯中加入雙縮脲試劑，透析袋內(nèi)溶液是否出現(xiàn)紫色并說(shuō)明判斷的依據(jù)：_____。

（3）圖4是用于分離蛋白質(zhì)的凝膠色譜柱，裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡的存在，原因是_____。a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從凝膠色譜柱中洗脫出來(lái)的是a，是因?yàn)?/span>a蛋白質(zhì)分子_____。

（4）圖2、圖3分別表示電泳法分離蛋白質(zhì)和紙層析法分離葉綠體中色素的結(jié)果。不同蛋白質(zhì)得以分離是因?yàn)?/span>_____；不同色素得以分離是因?yàn)?/span>_____。

Answer 1

【答案】防止紅細(xì)胞吸水漲破 磷酸緩沖溶液 出現(xiàn)紫色，雙縮脲試劑可以透過(guò)半透膜，與袋內(nèi)血清蛋白反應(yīng)，生成紫色物質(zhì) 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中的蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 相對(duì)分子質(zhì)量大，無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快 不同蛋白質(zhì)所帶的電荷性質(zhì)、分子大小和形狀等不同，導(dǎo)致電泳時(shí)遷移速度不同 不同色素在層析液中的溶解度不同，導(dǎo)致層析時(shí)擴(kuò)散速度不同

【解析】

血紅蛋白的提取和分離流程為：紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析→凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫。

分離綠葉中色素原理：各色素隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同，從而分離色素。溶解度大，擴(kuò)散速度快；溶解度小，擴(kuò)散速度慢。濾紙條從上到下依次是：胡蘿卜素（最窄）、葉黃素、葉綠素a（最寬）、葉綠素b（第2寬），色素帶的寬窄與色素含量相關(guān)。

（1）洗滌紅細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用生理鹽水而不使用蒸餾水的原因是防止紅細(xì)胞吸水漲破。

（2）要去除血紅蛋白中的小分子雜質(zhì)，采用圖1裝置進(jìn)行透析。透析液是磷酸緩沖溶液，一段時(shí)間后，若向燒杯中加入雙縮脲試劑，透析袋內(nèi)溶液出現(xiàn)紫色，判斷的依據(jù)：雙縮脲試劑可以透過(guò)半透膜，與袋內(nèi)血清蛋白反應(yīng)，生成紫色物質(zhì)。

（3）裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡的存在，原因是氣泡會(huì)攪亂洗脫液中的蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果；由圖4可知，a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從凝膠色譜柱中洗脫出來(lái)的是a，是因?yàn)?/span>a蛋白質(zhì)分子相對(duì)分子質(zhì)量大，無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。

（4）圖2、圖3分別表示電泳法分離蛋白質(zhì)和紙層析法分離葉綠體中色素的結(jié)果。不同蛋白質(zhì)得以分離是因?yàn)椴煌�蛋白質(zhì)所帶的電荷性質(zhì)、分子大小和形狀等不同，導(dǎo)致電泳時(shí)遷移速度不同；不同色素得以分離是因?yàn)椴煌�色素在層析液中的溶解度不同，�?dǎo)致層析時(shí)擴(kuò)散速度不同。