Question

【題目】亞麻酸（ALA）能夠促進(jìn)卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育。為了給水牛體外胚胎產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中合理使用亞麻酸提供理論依據(jù)，科研人員研究了不同濃度的亞麻酸對水牛卵母細(xì)胞體外成熟、早期胚胎發(fā)育的影響。分析回答：

①卵母細(xì)胞的收集和體外培養(yǎng)：從屠宰場水牛的卵巢中收集并處理卵母細(xì)胞，隨機(jī)分成5組，分別置于不同濃度亞麻酸的培養(yǎng)液中，在39℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22～24h。

②卵母細(xì)胞成熟判斷：在顯微鏡下觀察卵母細(xì)胞，判斷其是否成熟，統(tǒng)計結(jié)果如表1。

③體外受精：在受精溶液中進(jìn)行體外受精后，用顯微鏡觀察判斷是否完成受精。

④早期胚胎培養(yǎng)：將受精卵移入胚胎培養(yǎng)液中培養(yǎng)44～48h后檢查分裂情況，每隔48h更換一次培養(yǎng)液，第5～9天觀察囊胚發(fā)育情況，統(tǒng)計結(jié)果如表2。

表1亞麻酸對水牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響

表2亞麻酸對水牛早期胚胎發(fā)育的影響

（1）步驟①中，細(xì)胞培養(yǎng)箱中加5%CO2的作用是_____________。

（2）步驟②中，成熟卵母細(xì)胞內(nèi)染色體的行為特征是_____________。步驟③中，判斷是否受精的依據(jù)是_____________。

（3）步驟④中，受精卵經(jīng)_____________（時期）發(fā)育成囊胚，培養(yǎng)過程定期更換培養(yǎng)液的目的是_____________。

（4）根據(jù)實驗數(shù)據(jù)分析，亞麻酸溶液為200μmol·L-1時，對水牛卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育起_____________（促進(jìn)、抑制）作用。

（5）實驗結(jié)果表明，_____________μmol·L-1的亞麻酸對水牛卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育都較有利，判斷依據(jù)是_____________。

Answer 1

【答案】維持培養(yǎng)液pH的相對穩(wěn)定 染色體的著絲點排列在赤道板上 在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可否觀察到兩個極體 桑椹胚 清除有害代謝產(chǎn)物，補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì) 促進(jìn) 50μmolL-1 核成熟卵子數(shù)占卵母細(xì)胞的比例較高，囊胚數(shù)占培養(yǎng)卵數(shù)的比例較高

【解析】

1．動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）。
2．早期胚胎發(fā)育過程為：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原腸胚。
3．分析表格：亞麻酸溶液為0μmolL-1的一組為對照組，其他為實驗組。與對照組相比“核成熟卵子數(shù)占卵母細(xì)胞的比例”和“囊胚數(shù)占培養(yǎng)卵數(shù)的比例”即可判斷該濃度的作用是促進(jìn)還是抑制。

（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)時，細(xì)胞培養(yǎng)箱中加5%CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH的相對穩(wěn)定。
（2）卵母細(xì)胞培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期時才成熟，而減數(shù)第二次分裂中期的特征是染色體的著絲點排列在赤道板上；判斷是否受精的依據(jù)是在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可否規(guī)察到兩個極體。
（3）早期胚胎發(fā)育過程為：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原腸胚，因此步驟④中，具32個細(xì)胞的胚胎發(fā)育時期是桑椹胚；培養(yǎng)過程定期更換培養(yǎng)液的目的是清除有害代謝產(chǎn)物，補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)。
（4）表格1中亞麻酸溶液為0μmolL-1的一組為對照組，與其相比，亞麻酸溶液為200μmolL-1時，核成熟卵子數(shù)占卵母細(xì)胞的比例較高，囊胚數(shù)占培養(yǎng)卵數(shù)的比例較高，可見其對水牛卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育起促進(jìn)作用。
（5）表格2中，亞麻酸溶液濃度為50μmolL-1時，核成熟卵子數(shù)占卵母細(xì)胞的比例較高，囊胚數(shù)占培養(yǎng)卵數(shù)的比例較高，因此50μmolL-1的亞麻酸對水牛卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育都較有利。