Question

14．在某些深海魚中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因afp對(duì)提高農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價(jià)值．圖1所示示獲得轉(zhuǎn)基因萵苣的技術(shù)流程．請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題：

（1）獲取目的基因的主要途徑包括從自然界已有的物種中分離和人工合成．
（2）①過程需要的酶有限制酶和DNA連接酶
（3）重組質(zhì)粒除了帶有抗凍蛋白基因afp以外，還必須含有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因，這樣才能構(gòu)成一個(gè)完整的基因表達(dá)載體．
（4）如果受體細(xì)胞C₁是土壤農(nóng)桿菌，則將目的基因?qū)�入它的目的是利用農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞C₂，并將其插入到受體細(xì)胞C₂中染色體DNA上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，形成轉(zhuǎn)基因萵苣．經(jīng)②過程獲得的轉(zhuǎn)基因萵苣中的目的基因是否表達(dá)，在分子水平上可用抗原-抗體雜交法進(jìn)行檢測(cè)，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達(dá)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因萵苣培育成功．
（5）據(jù)體細(xì)胞雜交技術(shù)流程圖2回答下列問題：
在利用雜種細(xì)胞培育雜種植株的過程中，運(yùn)用的技術(shù)手段是植物組織培養(yǎng)；依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性；其中過程②常用的化學(xué)誘導(dǎo)劑是PEG；過程⑤是再分化階段．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本工具：分子手術(shù)刀”--限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、“分子縫合針”--DNA連接酶、“分子運(yùn)輸車”--載體．
2、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定．

解答 解：（1）目的基因的獲取可采取直接分離獲得也可采用人工合成方法，人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法．              
（2）提取目的基因需限制酶，將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合需DNA連接酶，故①過程需要的酶有限制酶和DNA連接酶．           
（3）基因表達(dá)載體的構(gòu)建包含：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因．          
（4）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)．還要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交．最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原--抗體雜交．
（5）在利用雜種細(xì)胞培育雜種植株的過程中，運(yùn)用的技術(shù)手段是植物組織培養(yǎng)，依據(jù)的原理是細(xì)胞的全能性，其中過程②稱為原生質(zhì)體融合，常用PEG誘導(dǎo)融合，過程④為脫分化，⑤為再分化．
故選答案為：
（1）人工合成    
（2）限制酶和DNA連接酶   
（3）標(biāo)記基因     
（4）轉(zhuǎn)化作用    染色體DNA   抗原-抗體雜交     
（5）植物組織培養(yǎng)  植物細(xì)胞的全能性  PEG  再分化階段

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程和植物組織培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠掌握基因工程的操作步驟，識(shí)記基因工程的操作工具及作用，識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過程，能夠結(jié)合圖示以及所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題，難度適中．