Question

【題目】基因工程可以按照人們的意愿賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。圖甲是基因工程的基本操作流程，圖乙是定量PCR技術中的一種常用探針。請回答下列有關問題：

（1）圖中①、②所需酶在作用上的主要區(qū)別是__________(答出一點即可)。與基因組文庫中的基因相比，cDNA文庫中的基因在結構上的特點是_______________。

（2）圖中③過程需要借助PCR技術，該過程所需的酶為__________。若利用PCR技術擴增目的基因的過程中消耗了126個引物分子，則該過程DNA擴增了______次。圖乙的TaqMan探針是定量PCR技術中的一種常用探針，其5'末端連接熒光基團(R)，3'末端連接淬滅劑(Q)。當探針完整時，R發(fā)出的熒光信號被Q吸收而不發(fā)熒光。在定量PCR擴增過程中，當擴增DNA遇到探針時，探針就會被水解而釋放出游離的R和Q，隨PCR擴增次數(shù)的增加，熒光信號____。

（3）若④過程為將目的基因導人植物細胞，最常用的方法是農(nóng)桿菌轉化法，該方法選擇Ti質粒作為運載體的原因是_________________________________。

（4）圖中⑤過程是______________________。要檢測目的基因是否成功表達，首先從轉基因生物個體中提取蛋白質，用相應的抗體進行___________________雜交。

Answer 1

【答案】參與①過程的酶催化形成磷酸二酯鍵，參與②過程的酶催化磷酸二酯鍵的水解 沒有內含子、啟動子和終止子等序列 Taq酶(熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶) 6 (逐漸)增強 Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體的DNA上，以保證目的基因穩(wěn)定存在和表達 目的基因的檢測與鑒定 抗原——抗體

【解析】

基因工程四步驟包括：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與表達。

分析題圖可知，過程①為逆轉錄，過程②為限制性核酸內切酶切割，過程③為目的基因擴增，過程④為將目的基因導入受體細胞，過程⑤為目的基因的檢測鑒定。

（1）圖甲中參與過程①的逆轉錄酶的作用是促進形成磷酸二酯鍵，參與過程②的限制性核酸內切酶的作用是促進磷酸二酯鍵的水解/斷裂；cDNA文庫來源于這種生物體內的mRNA的逆轉錄,而mRNA實質上來源于外顯子的轉錄，它不包括內含子和非編版碼區(qū)（啟動子和終止子等）序列；

（2）PCR技術由于過程中需要加熱使DNA變性、退火和延伸，故所需的酶為Taq酶，即熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶；隨著PCR次數(shù)的增加，R與Q不斷被水解釋放，熒光信號不斷增強；

（3）目的基因導入植物細胞時，由于Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體的DNA上，以保證目的基因穩(wěn)定存在和表達，故選擇Ti質粒作為載體；

（4）過程⑤為目的基因的檢測鑒定；從轉基因生物個體中提取蛋白質，可通過抗原-抗體雜交檢測目的基因是否表達成功。