Question

【題目】針對腫瘤細(xì)胞相關(guān)的異常分子和基因，可設(shè)計和研制特異性的靶點藥物，靶向殺傷腫瘤細(xì)胞。

（1）下圖所示轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TfR）與轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）結(jié)合，通過胞吞方式，將鐵元素運輸至胞內(nèi)。腫瘤細(xì)胞由于增長快速，需要更多的鐵元素，因此腫瘤細(xì)胞表面TfR 表達(dá)量___________(上升或下降)。利用單克隆抗體技術(shù)，可研制相應(yīng)的抗TfR抗體，它們與TfR特異性結(jié)合， _____________進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞增長。

（2）若想獲得單克隆抗體，可將___________的小鼠的B 細(xì)胞與___________融合，繼而篩選出_______________的雜交瘤細(xì)胞，大量培養(yǎng)獲得相應(yīng)抗體，由于該抗體來源于小鼠，稱為鼠源單克隆抗體。

（3）將該鼠源單克隆抗體與人癌細(xì)胞混合后培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)單獨使用抗體對人癌細(xì)胞的增殖無顯著影響，可能的原因是抗體與細(xì)胞表面TfR結(jié)合后___________，為探究該假說成立與否，采用熒光標(biāo)記定位的方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)在細(xì)胞膜上和細(xì)胞內(nèi)，則此實驗結(jié)果支持該假說。

（4）由于在本實驗中單獨使用抗體效果不佳，考慮利用抗體介導(dǎo)殺傷細(xì)胞對靶細(xì)胞的裂解作用來抑制癌細(xì)胞，該過程如圖2所示。若無論何種抗體，殺傷細(xì)胞都可與之結(jié)合，最終使靶細(xì)胞裂解死亡，則說明抗體Fc段在不同種類的抗體中_________（相同或不同）。

（5）人的殺傷細(xì)胞無法識別鼠源單克隆抗體的Fc段，科學(xué)家為此構(gòu)建了人-鼠嵌合抗體。該過程基本流程排序為__________。

A．逆轉(zhuǎn)錄獲得Fab基因編碼區(qū)

B．從分泌鼠源單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA

C．將其導(dǎo)入細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)

D．對基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定

E．將Fab段的基因編碼區(qū)與人的Fc段基因進(jìn)行拼接，構(gòu)建含人-鼠嵌合抗體基因的質(zhì)粒

Answer 1

【答案】上升 阻止了Tf與TfR結(jié)合，抑制鐵元素的攝取 免疫接種過TfR 骨髓瘤細(xì)胞 既能無限增殖又能分泌抗體 同樣會被內(nèi)吞進(jìn)細(xì)胞；TfR 最終會返回細(xì)胞膜表面，以至于抗體無法達(dá)到抑制細(xì)胞鐵攝取的目的，所以無法影響細(xì)胞增長 相同 BAECD

【解析】

1、單克隆抗體的制備過程是：對小動物注射抗原，從該動物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。

2、基因工程的基本步驟：①目的基因的獲取；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測與鑒定。

3、人工合成基因的方法主要有兩條途徑，一條途徑是以目的基因轉(zhuǎn)錄成的mRNA為模版，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補配對的原則，推測出它的基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以脫氧核苷酸為原料合成目的基因。

（1）腫瘤細(xì)胞表面TfR表達(dá)量增多，能夠與Tf結(jié)合，運輸更多的鐵元素，適應(yīng)腫瘤細(xì)胞的快速增長�？�TfR抗體與TfR特異性結(jié)合，阻斷了與Tf的結(jié)合途徑，鐵元素運輸受阻，腫瘤的生長受到抑制。

（2）若要獲得抗TfR的單克隆抗體，可將接種過TfR的免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，繼而篩選出既能無限增殖又能分泌抗TfR抗體的雜交瘤細(xì)胞，大量培養(yǎng)獲得該抗體。

（3）抗體與細(xì)胞表面TfR結(jié)合后，同樣會被內(nèi)吞進(jìn)細(xì)胞，TfR最終會返回細(xì)胞膜表面，以至于抗體無法起到抑制細(xì)胞鐵攝取的目的，所以無法影響細(xì)胞增長。

（4）由圖可知，殺傷細(xì)胞與抗體的Fc段結(jié)合，若無論何種抗體，殺傷細(xì)胞都可與之結(jié)合，說明抗體Fc段在不同種類的抗體中相同。

（5）由分析中基因工程的基本操作流程可知，構(gòu)建了人-鼠嵌合抗體過程基本流程排序為BAECD。