Question

肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let?7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖一請(qǐng)回答有關(guān)問題。

⑴進(jìn)行過程①時(shí)，需用________酶切開載體并用_____________酶連接以插入let?7基因。

（2）重組載體的基本組成成分包括_________ ________ ________ _________

(3)進(jìn)行過程②時(shí)，需用______酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。

(4)研究發(fā)現(xiàn)，let?7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖二。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取______進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let?7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中_____含量減少引起的。

 

Answer 1

（1）限制性核酸內(nèi)切（或限制） DNA連接酶

（2）目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因

（3）胰蛋白

（4）RNA RAS蛋白

【解析】

試題分析：

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用同種限制酶切割目的基因和載體，使之產(chǎn)生相同的粘性末端；用DNA連接酶可以將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來。

（2）基因表達(dá)載體由目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等四部分組成。

（3）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常用胰蛋白酶處理貼壁的細(xì)胞，使之相互分離，以利于傳代培養(yǎng)。

（4）檢驗(yàn)?zāi)康幕�因是否表達(dá)，常用分子雜交法。從被導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞內(nèi)提取RNA，與目的基因單鏈雜交，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已轉(zhuǎn)錄；由圖2知，當(dāng)let­7基因轉(zhuǎn)錄出來的miRNA與癌基因RAS轉(zhuǎn)錄出的mRNA雜交時(shí)，就會(huì)抑制RAS蛋白的產(chǎn)生，故肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中RAS蛋白含量減少引起的。

考點(diǎn)：本題考查基因工程的有關(guān)知識(shí)，意在考查考生識(shí)圖能力和理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。