Question

禽流感是由甲型流感病毒引起的一種禽類疾病綜合征，后來引起人類流感，治療該類流感的最好方法是注射疫苗．如圖為H5N1疫苗生產(chǎn)過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題．
（1）要獲得目的基因，首先要以合成H5N1病毒蛋白的RNA為模板合成病毒蛋白的DNA，過程①指的是

 

，過程③構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程需要的工具酶是

 

．
（2）基因工程中除質(zhì)粒外，

 

和

 

也可作為運(yùn)載體．
（3）一般情況下，過程④首先要用

 

將大腸桿菌處理成感受態(tài)的細(xì)胞后才能作為受體細(xì)胞．
（4）為檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常常要借助載體上

 

的表達(dá)；要準(zhǔn)確的方法是在含有

 

的DNA片段上用放射性同位素標(biāo)記，以此探針與基因組DNA雜交．最后還要檢測(cè)目的基困是否翻譯成了病毒蛋白質(zhì)，利用的技術(shù)是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：（1）獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取  ②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增  ③人工合成（化學(xué)合成）．原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．
（2）DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
（3）目的基因的檢測(cè)與鑒定，常用基因探針--用放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的含有目的基因DNA片段．Ⅰ、分子水平上的檢測(cè) ①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)Ⅱ、個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答： 解：
（1）在體外，人工以RNA為模板合成DNA的過程成為反轉(zhuǎn)錄．構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)需要DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體的末端．
（2）常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．
（3）將目的基因?qū)�人微生物�?xì)胞時(shí)，用Ca²⁺處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合（在緩沖液中）→一定溫度下，感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定，常用基因探針--用放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的含有目的基因DNA片段．Ⅰ、分子水平上的檢測(cè)  
  ①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
  ②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
  ③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)
Ⅱ、個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
故答案為：
（1）反轉(zhuǎn)錄         DNA連接酶
（2）λ噬菌體的衍生物    動(dòng)植物病毒
（3）鈣離子
（4）標(biāo)記基因   H5N1病毒蛋白的基因     抗原-抗體雜交技術(shù)

點(diǎn)評(píng)：本題考查了基因工程的相關(guān)內(nèi)容，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用．