Question

【題目】請回答下列蛋白質的提取和分離實驗相關問題：

（1）凝膠色譜法是根據(jù)_________________分離蛋白質的有效方法。

（2）蛋白質的提取和分離實驗中洗滌紅細胞的目的______________________________。

（3）重復洗滌三次，直至____________________，表明紅細胞已洗滌干凈。在該過程中離心速度過高和時間過長會導致___________________________。

（4）在凝膠色譜柱裝填時不得有氣泡存在，原因為氣泡會________________________。在操作中不能發(fā)生洗脫液流干漏出凝膠顆粒的現(xiàn)象，如果發(fā)生則___________________。

（5）在蛋白質的分離過程中如果觀察到__________________________________，說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】相對分子質量的大小 去除雜蛋白 上清液不再呈現(xiàn)黃色 白細胞等一同沉淀，達不到分離效果 攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果 凝膠色譜柱需要重新裝填 紅色區(qū)帶均勻一致地移動

【解析】

血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：
（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白。
（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。
（3）純化：調節(jié)緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質。
（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

（1）凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質量大小分離蛋白質的有效方法，分子量大的路徑短、速度快。

（2）蛋白質的提取和分離實驗中，首先要用生理鹽水洗滌紅細胞，其目的是去除雜蛋白。

（3）洗滌紅細胞后有利于后續(xù)步驟的分離純化，洗滌干凈的標志是離心后的上清液不再呈現(xiàn)黃色；該實驗的目的是分離白細胞，離心速度過高和時間過長會導致白細胞等一同沉淀，而達不到分離效果使實驗失敗。

（4）由于氣泡的存在會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分離效果，所以在裝填凝膠色譜柱時，不得有氣泡產(chǎn)生。在操作中不能發(fā)生洗脫液流干漏出凝膠顆粒的現(xiàn)象，如果發(fā)生則凝膠色譜柱需要重新裝填。

（5）在蛋白質分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動，說明色譜柱制作成功。