Question

【題目】回答下列（一）（二）小題

（一）請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細菌和脲酶固定化實驗的有關(guān)問題

（1）LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加_________，滅菌備用。

（2）尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用_______滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因為G6玻璃砂漏斗________，故用于過濾細菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。

（3）取適量含產(chǎn)脲酶細菌的10-4、10-5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h，推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)最少的是______（A. 10-5稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基 B. 10-5稀釋液+LB固體培養(yǎng)基 C. 10-4稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基 D. 10-4稀釋液+LB固體培養(yǎng)基）。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細菌菌落周圍出現(xiàn)______，其原因是細菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生______所致。

（4）制備固定化脲酶時，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是_________。

（二）某小組欲進行煙草原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)的研究。請回答：

（1）原生質(zhì)體的分離：在無菌條件下，取煙草無菌苗的葉片，放入含有0.5mol/L甘露醇（維持較高滲透壓）的_________混合液處理，經(jīng)過離心純化后獲得原生質(zhì)體。

（2）原生質(zhì)體的培養(yǎng)：將原生質(zhì)體進行培養(yǎng)，重新長出細胞壁，形成胚性細胞。此時，應(yīng)該_________培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利于胚性細胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細胞團，然后經(jīng)兩條途徑形成再生植株。途徑一：細胞團經(jīng)球形胚、_________和胚狀體，最后發(fā)育成植株。途徑二：細胞團增殖為愈傷組織，然后在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽，切割芽經(jīng)過生根后形成完整植株。上述發(fā)芽培養(yǎng)基中含量相對較高的激素是_________，胚性細胞的主要特點是：_________。

（A．液泡小、細胞核小 B．液泡大，細胞核大 C．液泡大，細胞核小 D．液泡小、細胞核大）

（3）為了對煙草的某些性狀進行改良，分離的到兩種煙草的原生質(zhì)體后，通過_________方法將他們的遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)獲得具有新性狀的再生植株。提取再生植株的DNA，采用_________擴增相關(guān)基因，來鑒定遺傳物質(zhì)是否成功重組。

Answer 1

【答案】瓊脂 高壓蒸汽 孔徑小，細菌不能濾過 A 紅色環(huán) 氨（或NH3） 除去游離的脲酶 纖維素酶和果膠酶 降低 心形胚 細胞分裂素 D 原生質(zhì)體融合 PCR

【解析】

本題主要考查培養(yǎng)基、酶固定化、植物組織培養(yǎng)等相關(guān)知識，要求考生熟記和掌握相關(guān)知識點的要點，能夠在試題所給予的相對簡單的情境中識別和使用它們。

（一）

（1）固體培養(yǎng)基常用瓊脂作為凝固劑，LB固體培養(yǎng)基加入一定的蒸餾水后再加瓊脂。

（2）對溶液、培養(yǎng)基等滅菌，常用的方法是高壓蒸汽滅菌；用G6玻璃漏斗，因為G6玻璃砂漏斗孔徑比細菌小，達到過濾除菌的目的。

（3）產(chǎn)生脲酶細菌菌落數(shù)目多，需稀釋倍數(shù)較少，且使用含有尿素溶液的培養(yǎng)基，故選A；由于脲酶能催化尿素產(chǎn)生NH3，NH3易溶于水形成具有堿性的氨水，培養(yǎng)基中含酚紅，使培養(yǎng)基變成紅色環(huán)。

（4）在固定化酶過程中，有部分酶沒有被固定在固相載體上，所以沖洗的目的是除去沒有被固定的游離脲酶。

（二）

（1）制備煙草原生質(zhì)體時需要除去細胞壁，植物細胞壁由纖維素和果膠組成，因此可以用纖維素酶和果膠酶除去植物細胞壁；
（2）原生質(zhì)體的培養(yǎng)：將原生質(zhì)體進行培養(yǎng)，重新長出細胞壁，形成胚性細胞的過程中，應(yīng)該降低培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利用胚性細胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細胞團。胚性細胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細胞團，然后經(jīng)兩條途徑形成再生植株，途徑一：細胞團經(jīng)球形胚、心形胚和胚狀體，最后發(fā)育成植株。途徑二：細胞團增殖為愈傷組織，然后在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽，切割芽經(jīng)過生根后形成完整植株。其過程中愈傷組織誘導(dǎo)產(chǎn)生芽的培養(yǎng)基中需要的細胞分裂素的比例較高，胚性細胞的主要特點是液泡小，細胞核大。
（3）為了對煙草的某些性狀進行改良，分離的到兩種煙草的原生質(zhì)體后，通過原生質(zhì)體融合的方法將他們的遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)獲得具有新性狀的再生植株。提取再生植株的DNA，采用PCR技術(shù)擴增相關(guān)基因，來鑒定遺傳物質(zhì)是否成功重組。