Question

【題目】大腸桿菌是動物腸道中的正常寄居菌。少數(shù)種類的大腸桿菌在一定條件下會使人患病，如腸道出血性大腸桿菌可使人腹瀉和便血，嚴(yán)重時危及生命。出血性大腸桿菌在添加血液的平板培養(yǎng)基上生長時，紅細(xì)胞被細(xì)菌破壞而褪色，導(dǎo)致菌落周圍形成透明圈。下圖表示從污染的食物中分離和提純該細(xì)菌的操作流程。請回答問題：

（1）細(xì)菌從肉湯培養(yǎng)基獲得的營養(yǎng)成分有______________。

（2）據(jù)操作流程可知，將細(xì)菌接種在血平板上的方法是______________，接種完畢后要灼燒接種工具的目的是為了______________。

（3）研究細(xì)菌的致病性，先要獲得純度較高的細(xì)菌蛋白，凝膠色譜法是分離蛋白質(zhì)的常用方法，在裝填凝膠柱時不得有氣泡產(chǎn)生，因為______________ ；若腸道出血性大腸桿菌的A蛋白質(zhì)比B蛋白質(zhì)后洗脫出來，則______________的相對分子質(zhì)量較大。

（4）純化后的細(xì)菌蛋白可以用_________測定分子量大小，在此過程中加入的SDS掩蓋了不同蛋白質(zhì)間的電荷差異，使得______________完全取決于分子的大小。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等 平板劃線法 避免污染環(huán)境和感染操作者 氣泡會擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 B蛋白 電泳法 電泳遷移率

【解析】

1、培養(yǎng)微生物的各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源。
2、微生物培養(yǎng)時的接種方法最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個細(xì)菌或真菌繁殖而成的子細(xì)胞群體——菌落。

3、凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分析蛋白質(zhì)的有效方法，相對分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動的速度快，因此相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。

（1）肉湯培養(yǎng)基中含有水分、無機(jī)鹽、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，因此可為微生物提供的營養(yǎng)成分有：碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。

（2）據(jù)操作流程可知，圖中的接種工具是接種環(huán)，故將細(xì)菌接種在血平板上的方法是平板劃線法；接種完畢后要灼燒接種工具的目的是避免污染環(huán)境和感染操作者。

（3）研究細(xì)菌的致病性，先要獲得純度較高的細(xì)菌蛋白，凝膠色譜法是分離蛋白質(zhì)的常用方法，由于氣泡會擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，故在裝填凝膠柱時不得有氣泡產(chǎn)生；凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動的速度快，因此若腸道出血性大腸桿菌的A蛋白質(zhì)比B蛋白質(zhì)后洗脫出來，則B蛋白的相對分子質(zhì)量較大。

（4）純化后的細(xì)菌蛋白可以用凝膠電泳法測定分子量大��；用凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)分子量時，需要在凝膠中加入SDS，目的是消除凈電荷對遷移率的影響（或掩蓋不同種蛋白間的電荷差別），使電泳遷移率完全取決于分子的大小。