Question

【題目】科研人員利用胚胎干細胞(ES細胞)對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療。其主要技術流程如圖，請回答下列問題：

（1）在獲取上皮細胞懸浮液的時候，通常要用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶處理組織，原因是___________________________________________________________________。

（2）步驟①應先對卵母細胞進行______處理。由圖可知，步驟②要分離出ES細胞，需將重組胚胎培養(yǎng)到_____________期。

（3）步驟③選擇ES細胞作為受體細胞而不是上皮細胞，是因為ES細胞___________。該過程需要先利用_______技術擴增干擾素基因，其前提是要有一段已知干擾素基因的核苷酸序列以便合成_____________。

（4）步驟④將ES細胞誘導分化成造血干細胞而不是其他細胞，其原因是_______________。

（5）為檢測干擾素基因是否在小鼠體內(nèi)成功表達，可以采用抗原——抗體雜交技術，其原理是____________________________________________。

Answer 1

【答案】細胞培養(yǎng)液的pH值接近中性，胰蛋白酶的最適pH值在7左右，而胃蛋白酶的最適pH值在2左右 去核 囊胚 在功能上具有發(fā)育的全能性 PCR 引物 造血干細胞能分化成產(chǎn)生干擾素的細胞（或T淋巴細胞） 抗體能和抗原特異性結(jié)合

【解析】

分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療的流程，其中①表示獲得重組胚胎的過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示采用基因工程技術將目的基因?qū)�入受體細胞。

（1）在獲取上皮細胞懸浮液的時候，由于細胞培養(yǎng)液的pH值接近中性，胰蛋白酶的最適pH值在7左右，而胃蛋白酶的最適pH值在2左右，因此通常要用胰蛋白酶而不用胃蛋白酶處理組織。

（2）根據(jù)圖示過程，步驟①表示通過核移植獲得重組胚胎的過程，因此應先對卵母細胞進行去核處理；由圖可知，步驟②要分離出ES細胞，需將重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期，從囊胚的內(nèi)細胞團中可以分離出ES細胞。

（3）步驟③表示采用基因工程技術將目的基因?qū)�入受體細胞，選擇ES細胞作為受體細胞而不是上皮細胞，是因為ES細胞在功能上具有發(fā)育的全能性；擴增目的基因（干擾素）一般采用PCR技術，而應用PCR技術的前提是要有一段已知干擾素基因的核苷酸序列以便合成引物。

（4）干擾素由T細胞分泌，根據(jù)淋巴細胞的起源與分化過程，步驟④中之所以將ES細胞誘導分化成造血干細胞，是因為造血干細胞能分化成產(chǎn)生干擾素的細胞（或T淋巴細胞）。

（5）在基因工程操作中檢測目的是否表達時，可以采用抗原——抗體雜交法，其原理為：利用目的基因的表達產(chǎn)物作為抗原獲得抗體，再利用抗體能和抗原特異性結(jié)合的特性，進而檢測受體細胞中目的基因是否表達。