Question

【題目】干擾素是動物或人體細胞受到病毒侵染后產(chǎn)生的一種糖蛋白，它是一種抗病毒的特效藥。中國“干擾素之父”侯云德院士利用基因工程的方法獲得了人干擾素a-lb，用于臨床疾病的治療�；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題。

（1）獲得基因工程用的干擾素基因，需從__________細胞的細胞質(zhì)中獲得mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，該基因中不包括正常干擾素基因的__________片段，再利用PCR技術(shù)擴增干擾素基因，擴增干擾素基因的前提是__________，以便合成引物。

（2）大腸桿菌和酵母菌均可作為基因工程的受體菌，生產(chǎn)干擾素a-lb時宜選用后者，原因是________。

（3）有人嘗試讓植物細胞產(chǎn)生干擾素，探索發(fā)現(xiàn)水稻胚？L細胞作為反應(yīng)器的效果比較好。若用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法進行目的基因的導(dǎo)入，添加一定量的酚類物質(zhì)效果更好，原因是__________。在用農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒構(gòu)建基因表達載體時，應(yīng)將干擾素基因插入T-DNA片段__________（填“內(nèi)”或“外”），Ti質(zhì)粒上的T-DNA的作用是____________________。鑒定水稻胚乳細胞中干擾素基因是否表達可采用的方法是__________。

Answer 1

【答案】T淋巴 啟動子、終止子和內(nèi)含子 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 干擾素為糖蛋白，酵母菌為真核生物，能對產(chǎn)生的干擾素進行加工，產(chǎn)生有活性的產(chǎn)物，大腸桿菌為原核生物，細胞中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器，不能產(chǎn)生有活性的干擾素 酚類化合物能吸引農(nóng)桿菌移向水稻細胞，利于農(nóng)桿菌的侵染 內(nèi) 可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并整合到受體細胞染色體的DNA上 抗原一抗體雜交

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）干擾素的基因在T淋巴細胞中選擇性表達，因此需從T淋巴細胞的細胞質(zhì)中獲得mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA不包括正常干擾素基因的啟動子、終止子和內(nèi)含子，擴增干擾素基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。

（2）干擾素為糖蛋白，酵母菌為真核生物，能對產(chǎn)生的干擾素進行加工，產(chǎn)生有活性的產(chǎn)物，大腸桿菌為原核生物，細胞中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器，不能產(chǎn)生有活性的干擾素，因此基因工程中通常選用酵母菌作為受體細胞。

（3）酚類化合物能吸引農(nóng)桿菌移向水稻細胞，利于農(nóng)桿菌的侵染，因此添加酚類化合物后的轉(zhuǎn)化效果更好。應(yīng)將干擾素基因插入T-DNA片段內(nèi)，Ti質(zhì)粒上T-DNA的作用是可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并整合到受體細胞染色體的DNA上。鑒定干擾素基因表達需采用抗原一抗體雜交的方法。