Question

【題目】（1）為擴大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。

①獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性內(nèi)切酶作用于圖38-1中的__________處，DNA連接酶作用于__________處。（填“a”或“b”）

②將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和__________法。

③為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標記的耐鹽基因做探針進行分子雜交檢測，又要用__________方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。

（2）下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖2、圖3中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

限制酶	BamH Ⅰ	Hind Ⅲ	EcoR Ⅰ	Sma Ⅰ
識別序列 及切割位點	↓ GGATCC CCTAGG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑	↓ GAATTC CTTAAG ↑	↓ CCCGGG GGGCCC ↑

④一個圖2所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有__________個游離的磷酸基團。

⑤用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是__________。

⑥重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了__________。

⑦構(gòu)建重組質(zhì)粒時，如果沒有EcoRⅠ限制酶，則可以使用__________限制酶處理質(zhì)粒、外源DNA。

Answer 1

【答案】a a 基因槍法（花粉管通道法） 一定濃度鹽水澆灌（移植到鹽堿地中） 0、2 Smal會破壞質(zhì)粒的抗藥性基因和外源DNA中的目的基因 篩選含有目的基因的細胞 BamHI和Hind Ⅲ

【解析】

分析圖1：根據(jù)題意和圖示分析可知：a處為磷酸二酯鍵，b處為氫鍵，限制酶作用于磷酸二酯鍵，而不是氫鍵；把表達載體導(dǎo)入受體細胞的方法對于動物、植物、細菌是不一樣的，這里要區(qū)分清楚；最后一步在鑒定時可以用DNA分子雜交法，抗原抗體雜交法，還有特性驗證試驗法，最簡單的就是移植到鹽堿地中看是否具有抗性。

圖2為質(zhì)粒，在基因工程中常作載體，由圖可知，質(zhì)粒中有四個酶切割位點，其中SmaⅠ切割位點在標記基因中。
圖3為含有目的基因的DNA分子片段，SmaⅠ切割位點位于目的基因中。
cDNA指mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA。

（1）①圖中a表示磷酸二酯鍵，是限制酶的切割位點，也是DNA連接酶的連接位點；b表示氫鍵，是解旋酶的作用位點。
②將重組DNA分子導(dǎo)入植物細胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法或花粉管通道法。

③要確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，從分子水平上，需要用放射性同位素標記的耐鹽基因做探針進行分子雜交檢測；從個體水平上，又要用一定濃度的鹽水澆灌方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。

（2）④由圖可知，質(zhì)粒是環(huán)狀的，切割前沒有游離的磷酸基團，質(zhì)粒中有一個SmaⅠ酶切割位點，所以切割后有兩個游離的磷酸基團。

⑤由圖可知，目的基因和標記基因中都有SmaⅠ酶切割序列，如用SmaⅠ酶會破壞質(zhì)粒的抗藥性基因和外源DNA中的目的基因。

⑥重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因是標記基因，作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細胞。

⑦構(gòu)建重組質(zhì)粒時，如果沒有EcoRⅠ限制酶，則可以使用BamHI和Hind Ⅲ限制酶處理質(zhì)粒、外源DNA。BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端不同，若用這兩種限制酶同時處理外源DNA和質(zhì)粒，再用DNA連接酶連接兩者時，還可避免切割的外源DNA、質(zhì)粒的粘性末端自身環(huán)化。