Question

7．內(nèi)皮素（ET）是一種多肽，主要通過與靶細(xì)胞膜上的ET受體（ET_A）結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)．科研人員通過構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ET_A基因在大腸桿菌細(xì)胞中的高效表達(dá)，其過程如下圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為，限制酶XhoⅠ的識別序列為．請據(jù)圖分析回答：

（1）進(jìn)行過程①時(shí)，需要加入緩沖液、引物、dNTP和反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）酶等．完成過程①②③的目的是獲取目的基因（ET_A基因）．
（2）過程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是．
（3）構(gòu)建的重組表達(dá)載體，目的基因上游的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，進(jìn)而可驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄．除圖中已標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，基因表達(dá)載體還應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是終止子．
（4）過程⑥要用CaCl₂預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的感受態(tài)細(xì)胞．
（5）將SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，其目的是有利于檢測ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①②③表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過程，④表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，⑤表示限制酶切割質(zhì)粒，⑥表示重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，⑦表示目的基因的檢測．

解答 解：（1）過程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入緩沖液、原料、逆轉(zhuǎn)錄酶和ATP和引物等，完成過程①②③的目的是 獲取目的基因（ET_A基因）．
（2）過程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，限制酶使得DNA的磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是．
（3）目的基因上游的啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，除圖示結(jié)構(gòu)外，完整的基因表達(dá)載體還應(yīng)具有復(fù)制原點(diǎn)、終止子等結(jié)構(gòu)．
（4）過程⑥中，要用CaCl₂預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)的細(xì)胞．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
故答案為：
（1）反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）             獲取目的基因（ET_A基因）
（2）磷酸二酯                     
（3）RNA聚合酶識別和結(jié)合          終止子
（4）感受態(tài)
（5）ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識圖能力和判斷能力，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息并運(yùn)用所學(xué)知識綜合分析問題和解決問題的能力．