Question

15．蘇云金桿菌（Bt）能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白．圖1是轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的重組DNA形成過程示意圖；圖2是毒素蛋白基因進入植物細胞后發(fā)生的兩種生物大分子合成的過程，據(jù)圖回答下列問題：
（1）將圖1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反應(yīng)管中有4種DNA片段．過程②需要用到DNA連接酶酶．
（2）假設(shè)圖1中質(zhì)粒原來BamHⅠ識別位點的堿 基序列變?yōu)榱肆硪环N限制酶BclⅠ識別位點的堿基序列，現(xiàn)用BclⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒，則該圖1中①的DNA右側(cè)還能選擇BamHⅠ進行切割，并能獲得所需重組質(zhì)粒嗎？并請說明理由能，切割后露出的黏性末端相同．
（3）若上述假設(shè)成立，并成功形成重組質(zhì)粒，則重組質(zhì)粒D
A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切開         B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切開
C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切開  D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開
（4）圖2中α鏈?zhǔn)莔RNA．不同細胞的同一DNA進行過程③時啟用的起始點不完全相同（在“都相同”“都不同”“不完全相同”中選擇），其原因是不同組織細胞中基因會進行選擇性表達
（5）要想檢測導(dǎo)入的Bt毒素蛋白基因是否表達，在分子水平上可用抗原-抗體雜交法進行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達蛋白質(zhì)產(chǎn)品．
（6）質(zhì)粒上的標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因細胞篩選出來．

Answer 1

分析 1、由于HindⅢ與BamHⅠ兩種限制酶酶切形成的黏性末端不一樣，圖中①中的DNA同時被這兩種限制酶切割后產(chǎn)生四種基因片段，即_B、HB、BH、B_ （H表示HindⅢ，B表示BamHⅠ）．
2、圖2表示基因的表達，DNA轉(zhuǎn)錄形成信使RNA（α鏈），翻譯形成多肽鏈．

解答 解：（1）圖中①的DNA含有兩個BamHⅠ酶的切割位點，含有一個HindⅢ酶的切割位點，所以用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切①中的DNA后，反應(yīng)管中有4種DNA片段．過程②中將目的基因與運載體連接起來需要用到DNA連接酶．
（2）由圖可知，BamHⅠ和BclⅠ切割DNA后露出的黏性末端相同．因此，質(zhì)粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變?yōu)橄拗泼窧clⅠ的堿基序列后，用BclⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒，用BamHⅠ和HindⅢ切割目的基因，仍能獲得重組質(zhì)粒．
（3）質(zhì)粒和目的基因都被HindⅢ切割，形成相同的黏性末端，則形成的重組質(zhì)粒還能被HindⅢ切割；質(zhì)粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變?yōu)榱肆硪环N限制酶BclⅠ的堿基序列，則形成的黏性末端是，而目的基因被BamHⅠ切割，則形成的黏性末端，則形成的重組DNA片段是，不能被BamHⅠ識別和切割．根據(jù)酶切位點和識別的堿基序列可知，重組質(zhì)粒只能被能被HindⅢ切開但不能被BamHⅠ切開．
（4）從圖2可知，a鏈形成是以DNA一條鏈作為模板進行轉(zhuǎn)錄形成的信使RNA分子；不同組織細胞的相同DNA在轉(zhuǎn)錄時，如果是相同基因一般轉(zhuǎn)錄起點相同，不同的基因轉(zhuǎn)錄起點不同，原因是基因的選擇性表達．
（5）在分子水平上檢測目的基因是否表達可用抗原-抗體雜交法，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達蛋白質(zhì)產(chǎn)品．
（6）質(zhì)粒上的標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因細胞篩選出來．
故答案為：
（1）4   DNA連接酶
（2）能，切割后露出的黏性末端相同
（3）D
（4）mRNA     不完全相同     不同組織細胞中基因會進行選擇性表達
（5）抗原-抗體雜交
（6）鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因細胞篩選出來

點評 本題以轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖為載體，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于中等難度題．