Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。請(qǐng)根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問(wèn)題：

(1)將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整___________。

(2)凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)_____________分離蛋白質(zhì)。

(3)洗滌紅細(xì)胞的目的是去除________，洗滌干凈的標(biāo)志是____________________。

(4)分離血紅蛋白時(shí)，由上到下第________層是血紅蛋白水溶液。

(5)下面是凝膠色譜法分離血紅蛋白時(shí)樣品的加入示意圖，正確的加樣順序是________。

(6)如果紅色區(qū)帶________________，說(shuō)明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 凝膠色譜柱的裝填 相對(duì)分子質(zhì)量的大小 雜蛋白(或血漿蛋白) 離心后的上清液中沒(méi)有黃色 三 ④①②③ 均勻一致地移動(dòng)

【解析】

1、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白；（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析；（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)；（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

2、分析題圖：第一個(gè)表格是：表示血紅蛋白的釋放，第二個(gè)表格是：凝膠色譜柱的裝填。

（1）樣品處理過(guò)程為：紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析，所以第一個(gè)表格是：表示血紅蛋白的釋放，第二個(gè)表格是：凝膠色譜柱的裝填。

（2）凝膠色譜法的原理是分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。

（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜質(zhì)蛋白，洗滌干凈的標(biāo)志是離心后的上清液中沒(méi)有黃色。

（4）分離血紅蛋白溶液時(shí)，將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，經(jīng)過(guò)中速長(zhǎng)時(shí)離心后，可明顯看到試管中溶液分為4層，從上往下數(shù)，第1層為甲苯層，第2層為脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層為血紅蛋白水溶液，第4層為雜質(zhì)沉淀層。

（5）正確的加樣順序可依據(jù)樣品在色譜柱及凝膠層中的滲入量進(jìn)行分析，可以得出是④①②③。

（6）如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，說(shuō)明凝膠色譜柱裝填得很成功，同時(shí)分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出。