Question

【題目】帕金森�。≒D）是常見的中老年神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，PD的主要病理特征之一是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡。miRNA-181a是一種非編碼單鏈微小RNA，為了探究其對帕金森病的影響，科研人員進行實驗。

（1）將育齡12.5d的胎鼠中腦黑質(zhì)組織充分剪碎，使用____________進行適當消化處理，獲取多巴胺能神經(jīng)元懸液，置于37℃、____________細胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)液中需要加入適量的胎牛血清，原因是______________________。

（2）MPP+是MPTP的代謝產(chǎn)物，可利用物質(zhì)MPP+在體外構(gòu)建PD細胞模型，其機理是：物質(zhì)MPP+ 可被多巴胺能神經(jīng)元通過_____________蛋白吸收，從而蓄積在神經(jīng)元中，引起神經(jīng)元的__________________________________。

（3）將上述培養(yǎng)的多巴胺能神經(jīng)元依據(jù)不同處理方法分為4組，培養(yǎng)一段時間后，使用酪氨酸羥化酶（TH）對各組細胞進行免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下可對多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目、初級突觸分枝及最長突觸長度進行觀察、統(tǒng)計和分析，得到如下結(jié)果：

注：TH陽性表示可被TH著色；*P<0.05，數(shù)據(jù)差異顯著，具有生物學(xué)意義

①實驗中TH的作用是_____________________________。

②miRNA-NC是分子生物學(xué)實驗中常用的miRNA陰性對照物質(zhì)，本研究中設(shè)置該組實驗的目的是_________________________________。

③從實驗結(jié)果來看，miRNA-181a+ MPP+組的各項指標______________，說明miRNA-181a對MPP+所致的多巴胺能神經(jīng)元損傷具有______________作用。

（4）該實驗的目的是_____________________________。

（5）請結(jié)合上述研究，提出一種針對帕金森疾病的治療方案。

___________________________________________________。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶 5%CO2 補充細胞生長所需的未知營養(yǎng)物質(zhì) 載體 變性死亡 選擇性標記多巴胺能神經(jīng)元 為實驗組（mi-RNA-181a+MPP+）作用效果提供參照 較miRNA-NC+MPP+組多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目有所增加，胞體形態(tài)較好，分枝數(shù)目與最長突觸長度有所改善，且表面較光滑，神經(jīng)元死亡程度較低 恢復(fù) 探究mi-RNA-181a對MPP+誘導(dǎo)的PD多巴胺能神經(jīng)元損傷的影響 利用mi-RNA-181a開發(fā)出治療PD的藥物

【解析】【試題分析】

本題結(jié)合探究miRNA-181a對MPP+誘導(dǎo)的PD多巴胺能神經(jīng)元損傷的影響的實驗，考查動物細胞培養(yǎng)、物質(zhì)出入細胞的方式的相關(guān)知識，以及實驗分析能力。本題采用12.5d的胎鼠中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元神經(jīng)元原代培養(yǎng),依據(jù)不同處理方法分為4組：（1）空白對照（Control）組;（2）PD模型（MPP+）組;（3）陰性對照（miRNA-NC＋MPP+）組;（4）miRNA-181a＋MPP+組。酪氨酸羥化酶（TH）可以選擇性標記多巴胺能神經(jīng)元,因此采用熒光顯微鏡對各組TH染色陽性神經(jīng)元數(shù)目、初級突觸分枝及最長突觸長度進行觀察,分析各組之間的差異�？忌�可從題圖結(jié)果中獲取有效信息，用于對實驗的分析，再結(jié)合題意對各小題進行分析作答。

（1）要制備動物細胞懸液，可先將動物組織充分剪碎，然后使用胰蛋白酶進行適當消化處理即可；動物細胞培養(yǎng)需在5%CO2細胞培養(yǎng)箱中進行；動物細胞培養(yǎng)液中需要加入適量的胎牛血清的目的是補充細胞生長所需的未知營養(yǎng)物質(zhì)。

（2）根據(jù)題意可知，MPP+蓄積在神經(jīng)元中，說明物質(zhì)MPP+進入神經(jīng)元是逆濃度梯度運輸，屬于主動運輸方式，故可推知物質(zhì)MPP+ 被多巴胺能神經(jīng)元吸收需要載體蛋白的協(xié)助；已知PD的主要病理特征之一是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡，而利用物質(zhì)MPP+可在體外構(gòu)建PD細胞模型，由此可推知物質(zhì)MPP+蓄積在神經(jīng)元中，會引起神經(jīng)元的變性死亡。

（3）①根據(jù)題意可知，實驗中TH的作用是選擇性標記多巴胺能神經(jīng)元。

②miRNA-NC是分子生物學(xué)實驗中常用的miRNA陰性對照物質(zhì)，由此可推知本研究中設(shè)置該組實驗的目的是為實驗組（miRNA-181a+MPP+）作用效果提供參照。

③從實驗結(jié)果來看，Control組（空白對照組）多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目、初級突觸分枝及最長突觸長度均最大，且表面較光滑，神經(jīng)元死亡程度最低；miRNA-181a+ MPP+組的各項指標較miRNA-NC+MPP+組多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目有所增加，胞體形態(tài)較好，分枝數(shù)目與最長突觸長度有所改善，且表面較光滑，神經(jīng)元死亡程度較低。說明miRNA-181a對MPP+所致的多巴胺能神經(jīng)元損傷具有恢復(fù)作用。

（4）綜上所述，可推知該實驗的目的是探究miRNA-181a對MPP+誘導(dǎo)的PD多巴胺能神經(jīng)元損傷的影響。

（5）結(jié)合上述研究，可知miRNA-181a對MPP+所致的多巴胺能神經(jīng)元損傷具有恢復(fù)作用。所以可利用miRNA-181a開發(fā)出治療PD的藥物對帕金森疾病進行治療。