Question

人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基因與載體用

 

切割后，通過(guò)DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．檢測(cè)目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用

 

技術(shù)．
（2）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是

 

．為了獲得母羊，移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行

 

．利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的

 

．
（3）若在轉(zhuǎn)ht-PA基因母羊的羊乳中檢測(cè)到

 

，說(shuō)明目的基因成功表達(dá)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
目的基因分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．

解答： 解：（1）htPA基因與載體需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通過(guò)DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．檢測(cè)目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)，原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對(duì)供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過(guò)獲能（處理），才具備受精能力．利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的全能性．
（3）基因表達(dá)成功時(shí)可獲得目的基因的產(chǎn)物，既在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測(cè)到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說(shuō)明目的基因成功表達(dá)．
故答案為：
（1）同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）    DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）超數(shù)排卵    獲能（處理）   全能性
（3）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點(diǎn)評(píng)：本題考查了基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記基因工程的操作步驟；識(shí)記細(xì)胞全能性的概念等．