Question

4．基因工程中，需要使用限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選．已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-．
（1）根據(jù)已知條件和圖回答下列問題：
①上述質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割．
②將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處，還要加入適量的DNA連接酶．
③請指出質(zhì)粒上至少要有一個標(biāo)記基因的理由：檢測重組質(zhì)粒（或目的基因）是否導(dǎo)入受體細(xì)胞．
（2）基因工程操作步驟的核心基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（3）檢測目的基因是否表達(dá)的方法抗原-抗體雜交．

Answer 1

分析 分析題圖：由于限制酶Ⅱ能識別限制酶Ⅰ的識別序列，限制酶Ⅰ不能識別限制酶Ⅱ的識別序列．要將目的基因從該DNA鏈中提取出來，需要在目的基因左右切開，所以要用限制酶Ⅱ；質(zhì)粒不能用限制酶Ⅱ，否則會將兩個標(biāo)記基因都給切割開．

解答 解：（1）①限制酶Ⅱ能識別限制酶Ⅰ的識別序列，限制酶Ⅰ不能識別限制酶Ⅱ的識別序列，要將目的基因從該DNA鏈中提取出來，需要在目的基因左右切開，所以要用限制酶Ⅱ；質(zhì)粒要用限制酶Ⅰ切割，不能用限制酶Ⅱ切割，否則會將兩個標(biāo)記基因都給切割開．
②將目的基因與質(zhì)粒連接起來需要使用DNA連接酶．
③質(zhì)粒上至少要有一個標(biāo)記基因，目的是檢測重組質(zhì)粒（或目的基因）是否導(dǎo)入受體細(xì)胞．
（2）基因工程操作步驟的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
（3）檢測目的基因是否表達(dá)常用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）①ⅠⅡ②DNA連接酶        ③檢測重組質(zhì)粒（或目的基因）是否導(dǎo)入受體細(xì)胞
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（3）抗原-抗體雜交

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．